1．在疾病诊断中是否可使用T-SPOT 检测?
在结核病诊断中，T-SPOT 非常有用。如果T-SPOT分析血液细胞后出现阳性结果，虽然不能证明是活动性疾病，却可以在医生寻找分枝杆菌时提供支持。另外，目前正在研究将T-SPOT用于非血样本（胸腔积液和腹水等）。我们最近证实，在患有活动性肺结核但痰涂片结果为阴性的患者中，T-SPOT 检测非血样本具有极高敏感性和一定特异性。
2．T-SPOT 阴性结果如何解读？
阴性结果基本可以排除结核分支杆菌（MTB）感染存在，临床诊断上首选排除结核病，尤其在结核高发、免疫功能正常及无可靠依据；
假阴性：窗口期；免疫功能不全（HIV感染者），特殊肺外结核（结脑）；实验操作不当。
注意：结核诊断较复杂，出现阴性结果， 临床医生结合其它诊断方法确诊。
3．T-SPOT 阳性结果如何解读？
临床症状
影像学
阳性解读
1.
结核中毒症状
支持结核病
支持活动性结核病
2.
结核中毒症状
无
支持MTB感染
3.
无
无
支持LTBI感染
4.
无（结核病史）
无
陈旧结核病
5.
4种NTM感染，会出现假阳性
4．如何诊断潜伏性结核感染LTBI?
几乎所有LTBI 患者都是通过一种已使用百年的方法检测，那就是结核菌素皮肤试验（TST）。基于TST 的局限，已开发出一种更敏感和更特异的血液检测方法——γ干扰素释放检测（IGRA）。这种方法可采用ELISPOT 和ELISA 两种平台。
ELISPOT（T-SPOT.TB）侧重于两种抗原（ESAT-6 和CFP10）的特异性，以便快速发现LTBI 患者。采用T-SPOT.TB 检测时，可以将BCG 疫苗免疫反应与真正的结核感染区分开来。
与抗酸杆菌（AFB）患者的结核分枝杆菌阳性培养结果相比，T-SPOT.TB 检测具有更高的敏感性和特异性。
注意：结核感染的检测是没有金标准的，目前国际上认可的是IGRA 方法检测。
5．结核菌培养存在局限？
获得阳性培养结果的时间取决于多种因素：
首先，获得阳性培养结果取决于标本中的分枝杆菌载量，无论是采用精密的检测技术还是直
接肉眼观察培养板或培养基。
其次，如果以前使用过抗生素则会抑制细菌培养。根据我的经验，在结核发病率较低的国家里，一般医生会用抗生素治疗肺炎或上呼吸道感染，而不会首先考虑活动性结核病的可能性。
第三，用于培养分枝杆菌的培养基也会影响获得阳性结果的时间。
对于临床医生来说，等待2-12 周才能获得明确的培养结果确实令人头疼，尤其是当这些结果是阴性时。
6．结果处在灰区（斑点5-7时）怎么办？
当空白对照孔斑点数为0-5 个并且（抗原A 或抗原B 斑点数）减去（空白对照孔斑点数）
等于5-7 时，此结果被认为是“灰区”或“临界值”。
如果得到“灰区”的结果，不能认为是“不确定”的结果，也就是说处在5，6，7 个斑点的结果仍然是有效的结果，应该按照“结果判读标准”来确定“有反应”或“无反应”。
应当利用所有可利用相关的的临床信息进行判断，必要时可进行复查。
7．T-SPOT 阳性的患者，需要抗结核治疗吗？
结核的诊断较复杂，T-SPOT.TB目前是诊断MTB感染的有效手段，灵敏度和特异性达95%；是否需要抗痨治疗，要医生结合病人的情况，做出判断。但是使用免疫抑制剂的病人，建议预防性抗痨治疗。
8．多少个斑点是活动性结核？
实验结果阳性说明患者体内有结核杆菌感染存在，是潜伏性还是活动性需要结合临床症状来判断，斑点数越多越倾向于活动性结核。但是人与人有个体差异，没有具体的斑点数字可以依据。从统计上来看，潜伏感染者和活动性结核病人的实验结果斑点数分布范围是基本相当的，从0 至几百都有，但是活动性病人的平均斑点数比潜伏感染者更多一些。
9．陈旧性结核T-SPOT 的结果是阴是阳（既往感染史是否会影响T-SPOT.TB 检测结果）？
T-SPOT 检测的是结核特异效应T 淋巴细胞，说明是现症感染，结果阳性说明正在结核感染， 但不确定是潜伏性还是活动性。如果陈旧性结核T-SPOT 结果是阳性，则说明患者体内还存在结核分枝杆菌，还在结核感染中。文献显示，大概只有30%左右的活动性结核患者经过治疗，T-SPOT 结果会转阴。陈旧性结核体内会存在记忆T 细胞，但记忆T 细胞在全血中的数量非常少，而且抗原再次激活孵育时间远远超过24h，不会因为记忆细胞的存在而产生斑点。
10．T-SPOT 结果能反映抗痨治疗效果吗？
多篇文献数据显示随着抗结核治疗，T-SPOT 结果斑点数量几乎都有所下降。但并不是所有经过治疗的T-SPOT 结果都会转阴，只有部分结果转阴。可能是由于并不是所有的结核分枝杆菌在治疗过程中都可以被杀死。若还有少量存活在体内，它们仍可刺激T 细胞从而在T-SPOT 检测中被识别。
11．T-SPOT 的阳性率大概有多少？
不同地区、不同医院、不同科室阳性率都有差别。整体来说，结核定点医院的阳性率在50% 左右，综合性医院的阳性率在20-30%。
12．面对“菌阳”病人，但其T-SPOT 检测为阴性,原因？
任何一种定性诊断都会出现假阴性和假阳性的结果，针对该问题有以下原因：
其一, 出现TSPOT假阴性，窗口期、免疫功能不全、特殊肺结核等导致
其二，抗酸染色等方法不能区分TM和NTM，菌阳患者为非结核分枝杆菌。
13．培养确诊阳性（或临床确诊结核），但T-SPOT 为阴性，原因？
首先详细询问病人的情况，是不是合并一些基础疾病（血液病，HIV 患者等），是不是特殊的肺外结核（结核性脑膜炎，粟粒性结核等），是不是儿童或老年人（年龄特别小或特别大）。因为T-SPOT 的准确率在90％以上，并不是100％，再者评估一个方法学准确性， 要看一批数据，而不能看单一的数据。T-SPOT 在肺结核90％以上，肺外85％以上，儿童， 结脑，艾滋病80％左右，是目前现有方法中灵敏度最高的。另外，再询问病人是不是服用过一些广谱抗菌的药物（喹诺酮等），也能抑制结核杆菌，可能会造成T-SPOT 阴性结果。
14．病人血标本结果阴性，体液标本阳性，到底是什么结果？如果这样，直接抽体液做不是更省钱？
血标本阳性说明患者体内有结核感染存在，但是不能确定结核发病部位，而非血标本阳性可以局部确诊结核发病部分，其灵敏度大于95%，有文献支持。进行非血标本检查时一定要同时送检血液标本，因为有可能两者结果不同：
1 血标本阴性，非血标本阳性。说明存在结核感染，感染部位与体液来源部位相关性很大，因为效应T 细胞随着血液循环趋化到病灶部位，炎性细胞数量都远超过外周血，很可能出现这种结果。
2 血标本阳性，非血标本阴性。说明患者体内虽然存在结核感染，但是发病原因可能与结核无关。所以建议检查非血标本的同时检查血标本。常规情况下，不是所有患者都能采非血标本，但是血标本方便快捷，侵入性低，因此建议抽血检查，如果病人有体液标本，可以再次复查，这样双重保险，能够确诊比什么都重要。
注：目前还没有非血样本的cutoff值，所以阳性结果也是在文献数据的支持下判断的
15．为什么儿童和成人的采血量不同？
T-SPOT 实验需要PBMC 浓度达到25 万个/100μl，PBMC 中淋巴细胞占90%左右。儿童全血中含淋巴细胞1.6～8×106 个/mL，2-3ml 全血即可，成人全血中含淋巴细胞0.8～4×106 个/mL，4-6ml 即可。
注：免疫力低下、贫血等特殊人群淋巴细胞数会偏少，采血量要增加到6-8ml。
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