春华秋实，举国上下共度国庆佳节！在这个美好的日子里，《国际肝病》编辑部精心制作了“戊型肝炎-国庆特辑”，特别邀请到国内几位肝病大咖，为广大读者科普有关戊型肝炎的健康小知识。在临床诊断中，最常用于检测HEV感染的方法是检测患者血清中的抗HEV-IgM和IgG抗体。HEV感染后3-4周，患者血清中可检测到抗-HEV IgM抗体（图1）。抗-HEV IgM阳性是临床判定急性HEV感染重要标志。然而，抗-HEV IgM抗体出现时间较晚，往往容易导致误诊或漏诊。患者检测到抗-HEV IgM抗体阳性时，还应进一步结合临床症状，如有无黄疸，肝功能是否异常，有无消化道症状等，并同时检测血清或粪便中HEV RNA或HEV抗原进一步研判。在HEV感染4-5周后，可检测到抗-HEV IgG抗体，并持续阳性一年或数年，是既往HEV感染的标志，不能作为HEV急性感染的依据。
图1. HEV感染进程[1]
HEV抗原的检测可用于判定HEV感染的存在。临床上可以通过双抗体夹心ELISA法检测血液或尿液中的HEV抗原，其灵敏度和特异性均较高。近期研究发现，HEV感染者的尿液中存在大量的HEV抗原，显著高于血清中的抗原（图2）。在病毒复制期，患者尿液抗原的阳性率达95.7%，显著高于血清抗原阳性率（72.3%）及RNA阳性率（70.2%）。因此，尿液可作为HEV抗原检测的标本来判定HEV感染[2]。
图2. HEV感染者尿液中HEV抗原比血液中更高且更稳定[2]
HEV RNA阳性是HEV感染的直接证据。HEV感染动物模型显示，HEV感染3-5天即可在患者血清和粪便中检测到HEV RNA，并可持续排毒4-6周[3]。虽然在出现临床症状后1-2周内，仍有70%～80%患者的粪便和血清中可检出HEV RNA，但部分患者体内的病毒已基本清除。并且成年人感染HEV多为隐性感染，无典型的临床症状。因此，往往发生漏诊。此外，据WHO报道，即便是同样的HEV检测引物，但不同实验室的检测结果也存在差异[4]，因此，HEV RNA阴性并不能排除HEV急性感染，需结合HEV抗原或抗HEV-IgM抗体进行综合研判。
原位杂交（In situ hybridization，ISH）是特定标记的已知核酸序列为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸进行精确定量定位的过程，可进行定性、定位和定量分析，已成为最有效的分子诊断技术，在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面非常出色。尤其是近年新发展的RNAscope探针技术，可以灵敏地检测到临床肝脏组织中HEV RNA的存在，可用于临床肝穿组织或新的HEV复制位点的确认（图3）。
图3. ISH法检测肝脏组织中HEV RNA的存在[5,6]
免疫组化是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性及相对定量的研究。利用免疫组化法检测HEV抗原也可作为肝癌患者或慢性感染者肝脏组织中HEV感染的直接证据（图4）[7]。
图4. 免疫组化法检测HEV抗原
参考文献：（上下滑动查看更多）
[1] Al-Sadeq D W, Majdalawieh A F, Mesleh A G, et al. Laboratory challenges in the diagnosis of hepatitis E virus. J Med Microbiol, 2018, 67(4): 466-480.[2] Ying D, He Q, Tian W, et al. Urine Is a Viral Antigen Reservoir in Hepatitis E Virus Infection. Hepatology, 2022,[3] Yu W H, Hao X H, Li Y, et al. Vertical transmission of hepatitis E virus in pregnant rhesus macaques. Sci Rep-Uk, 2020, 10(1):[4] Baylis S A, Blumel J, Mizusawa S, et al. World Health Organization International Standard to Harmonize Assays for Detection of Hepatitis E Virus RNA. Emerg Infect Dis, 2013, 19(5): 729-735.[5] Kawai H F, Koji T, Iida F, et al. Shift of hepatitis E virus RNA from hepatocytes to biliary epithelial cells during acute infection of rhesus monkey. J Viral Hepatitis, 1999, 6(4): 287-297.[6] Choi C, Chae C. Localization of swine hepatitis E virus in liver and extrahepatic tissues from naturally infected pigs by in situ hybridization. Journal of Hepatology, 2003, 38(6): 827-832.[7] Situ J, Wang W, Long F, Yang W, Yang C, Wei D, Yu W, Huang F. Hepatitis E viral infection causes testicular damage in mice. Virology. 2020 Feb;541:150-159.从事HEV相关的研究十五年，突破性建立了HEV体外培养体系，获得了高效的、可连续传代的HEV毒株，申请获得了HEV培养及灭活疫苗研发的专利，并建立了HEV药物筛选平台；首次报道了奶牛是HEV的储存宿主，饮用HEV RNA阳性的牛奶可导致恒河猴感染；首次建立了HEV慢性化感染恒河猴模型，揭示了HEV突变可导致慢性化感染；首次报道了HEV可以在睾丸复制，并造成男性生殖损伤；成功建立了HEV感染恒河猴、BALB/c裸鼠、BALB/c小鼠和树鼩等动物模型；构建了HEV感染性克隆，包括携带EGFP的HEV感染性克隆，可以示踪HEV在体内外的复制。课题组在GUT、Hepatology、Journal of Hepatology等国际重要期刊发表学术论文七十余篇，其中SCI收录50余篇；作为副主编出版专著1部；登记软件著作权1项；授权专利3项。主持国家自然科学基金项目3项、云南省杰出青年项目1项、云南省应用基础重点项目1项、中国博士后面上资助项目1项、中国博士后特别资助项目1项、云南省应用基础研究面上项目2项、云南省教育厅项目1项。获省部级奖励2项。
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