责任编辑：杨青 曾吉
无菌体液采用全自动血培养仪进行培养的研究进展（一）
鲁炳怀 民航总医院
脑膜炎、关节炎、心包炎、腹膜炎、脓胸等严重感染的诊断有赖于相关体液的培养。采用传统培养方法（固体培养如血平皿、巧克力平皿；或使用脑心浸液增菌）时病原菌检出率较低，近年来使用血培养仪开展无菌体液培养的研究较多。结论较为明确，即与传统的平皿直接接种相比，全自动血培养仪用于无菌体液培养，可通过自动定期监测及时发现病菌的生长，缩短病原菌检出时间，同时延长培养时限可提高检出率。
为什么采用血培养瓶进行无菌体液的培养？
无菌体液主要包括胸腔液、腹腔液、胆汁、腹膜透析液、关节液、穿刺液（aspirates）、羊水、心包液、脑脊液、脓腔内脓液等处于封闭腔隙的体液。
Lakshmi V[1]对1500份无菌体液样本分别采用梅里埃公司的BacT/Alert血培养仪与传统方法进行的对照研究中，发现传统方法培养阳性标本检测需时间约18～24h，苛养菌48～72h，使用BacT/Alert检出革兰阴性菌时间多小于12h，革兰阳性菌为12～16h，培养时间明显缩短，同时对于早期发现临床标本中的厌氧菌感染也有明显作用。尤其对于深部脓肿而言，与常规培养相比，BacT/Alert更易发现化脓性链球菌、米勒链球菌与肺炎链球菌。
Bourbeau P等[2]对于怀疑有自发性腹膜炎（Spontaneous Bacterial Peritonitis，SBP）患者的腹腔液用血培养瓶培养进行研究，表明有利于临床发现致病菌，因此建议SBP诊断中常规采用培养瓶。
von Essen等[3]曾报道21%的关节液标本只在血培养瓶内生长而传统方法阴性。Yagupsky 等[8]对儿童的关节液的培养发现11株金氏菌属（kingella kingii）可在血培养瓶中生长，而传统方法仅检出1株。
表1 全自动血培养仪用于无菌体液培养的研究总结
由表1的统计可见，血培养仪法较常规方法检出率显著增高，其主要机制在于以下5个方面：
多数情况下体液内含菌量极少，增加培养阳性率的方法是增加培养样本体积。血培养仪法的标本用量一般大于传统方法，与传统的平皿20μl～1ml用于培养或增菌相比，血培养瓶内可注入约5～10ml的无菌体液，有效地提高了受检标本量，使得检出机率大为增加；
血培养瓶内为液体培养基，与无菌体液的环境相似，较传统培养方法的固体平皿（血平皿或巧克力平皿）更适于细菌生长；
常规培养方法一般将培养时间设定为48h，不生长则报阴性，而血培养仪一般培养时间为5～7天，有利于在感染菌量较少、苛养菌或酵母样真菌感染等的检出[4]；
许多患者在收集无菌体液标本前已使用抗生素，使用传统方法培养或增菌时残存的抗生素可抑制病原菌生长，而致假阴性结果。而血培养瓶内多加入一些吸附抗生素的物质，如树脂（BD Bactec血培养仪）、活性碳（梅里埃Bact/Alert血培养仪）等，有助于病原微生物的检出。
米勒链球菌等草绿色链球菌是脑脓肿、肝脓肿、皮肤感染的重要病原菌，具有厌氧或微需氧下成长的特性，常规的需氧或CO2条件下，不易生长。
同时，由于培养瓶中含有营养丰富的物质，利于微生物生长，自动培养仪连续监测，及时报警，可大为缩短检测时限，以目前临床最常用的BD BACTEC?与梅里埃公司Bact/ALERT培养瓶为例，不仅可培养出的微生物覆盖面广，而且极少量的微生物也能即时检测，表2～3根据培养瓶的说明书或相关资料列出不同菌在不同接种菌量的报阳平均时限。由表3可知，不同细菌的种类对于报阳时限影响较大，如酵母样真菌、革兰阴性厌氧菌的报阳时限明显延长，培养瓶接种菌量对于报阳时限影响似相对较小。相差10倍的接种菌量报阳时限相差无多，但还有待进一步大量研究的结果。血培养瓶检测灵敏度较高，≤ 10CFU/30~40mL的菌量即可检出。
▼▼▼
表2 BD BACTEC? 培养瓶接种不同微生物时的报阳时限（接种菌量 30 CFU/瓶）
▼▼▼
表3 梅里埃公司BacT/Alert 培养瓶接种不同微生物时的报阳时限
如何确定标本采集量？
使用血培养瓶用于体液培养时应考虑标本量与血培养瓶内培养液体积比例的问题，一般达到1:5时，即采集8 ～10ml标本时检出率最高，因此在临床条件满足的情况下，应尽量采集8～10ml / 培养瓶。但无菌体液毕竟不同于血液，有时可能并不能收集足够量，标本量过少并不能获得理想的临床检测结果。例如，Sharma S等人对于细菌感染性眼内炎的研究表明 方法[12]。根据多家的研究结论，建议如下：
（1） 当标本满足标本量3～10ml/瓶时，采用成人培养瓶；
（2） 标本量不足3ml时，采用专用儿童培养瓶（适用0.5～5ml的标本培养）；
（3） 若
参考文献
[1] Lakshmi V. Culture of body fluids using the bact/alert system. Indian J Med Microbiol. 2001; 19(2): 44-50. PMID: 17664808
[2] Bourbeau P, Riley J, Heiter BJ, et al. Use of the BacT/Alert Blood Culture System for Culture of Sterile Body Fluids Other than Blood. J Clin Microbiol. 1998; 36(11):3273-7. PMID: 9774578
[3] von Essen R, H?ltt? A. Improved method of isolating bacteria from joint fluids by the use of blood culture bottles. Ann Rheum Dis. 1986;45(6):454-7. PMID: 3524479
[4] Daur AV, Klimak F Jr, Cogo LL, et al. Enrichment methodology to increase the positivity of cultures from body fluids. Braz J Infect Dis. 2006;10(6):372-3. PMID: 17420907
[5] Reisner BS, Woods GL. Times to detection of bacteria and yeasts in BACTEC 9240 blood culture bottles. J Clin Microbiol. 1999; 37(6): 2024-6. PMID: 10325369
[6] Sorlin P, Mansoor I, Dagyaran C, et al. Comparison of resin-containing BACTEC Plus Aerobic/F* medium with conventional methods for culture of normally sterile body fluids. J Med Microbiol. 2000; 49(9):787-91. PMID: 10966226
[7] Udayan U, Dias M. Evaluation of BACTEC? blood culture system for culture of normally sterile body fluids. Indian J Crit Care Med. 2014 Dec;18(12):829-30.
[8] Cetin ES, Kaya S, Demirci M, Aridogan BC. Comparison of the BACTEC blood culture system versus conventional methods for culture of normally sterile body fluids. Adv Ther. 2007;24(6):1271-7.
[9] Minassian AM, Newnham R, Kalimeris E, Bejon P, Atkins BL, Bowler IC. Use of an automated blood culture system (BD BACTEC?) for diagnosis of prosthetic joint infections: easy and fast. BMC Infect Dis. 2014;14:233.
[10] Akcam FZ, Yayli G, Uskun E, Kaya O, Demir C. Evaluation of the Bactec microbial detection system for culturing miscellaneous sterile body fluids. Res Microbiol. 2006 Jun;157(5):433-6.
[11] Wang G, Yang X, Zhu J, Dong W, Huang M, Jiang G, Zhao L, Qin S, Chen X, Huang H. Evaluation of the efficacy of Myco/F lytic system, MGIT960 system and Lowenstein-Jensen medium for recovery of Mycobacterium tuberculosis from sterile body fluids. Sci Rep. 2016;6:37757.
