配制溶液的一般实验步骤

配制溶液步骤因配置的溶液不同而有所不同，现举两个例子：

举例1：配置0.05mol/L，400mL NaOH溶液的步骤：

要准确配置氢氧化钠的浓度，则要用容量瓶定容，实验室没有400毫升的容量瓶，则选用500毫升的容量瓶。
1.计算需要氢氧化钠的质量： 
0.5L*0.05mol/L*40.01=1.000克 
2.称1.000克氢氧化钠于烧杯中，加少量水溶解，然后倒入500毫升容量瓶里，分3次洗烧杯，将溶液全部倒入容量瓶里，最后用水稀释至刻度线，摇匀，即，得到0.05mol/L的氢氧化钠溶液。
如果不需要很准确的话，可以直接用量筒量400毫升，称的时候只要称0.8克就可以了。

 

举例2：配置1.5mol/L的稀硫酸200mL步骤：

第1步：计算：根据C1V1=C2V2，计算需要浓硫酸的体积； 
第2步：量取，利用刻度吸管吸取需要浓硫酸的体积；
第3步：稀释，将浓硫酸转移到小烧杯中，加少量水稀释；
第4步：转移,待溶液温度降低后，将烧杯中的硫酸转移到200mL容量瓶中； 
第5步：洗涤，洗涤小烧杯，和转移的时候用到的玻璃棒，至少三次，将洗涤的水一并转移到容量瓶中； 
第6步：定容，加水定容到刻度线，在距离刻度线一厘米左右改用胶头滴管定容； 
第7步：摇匀,将溶液摇匀,如果液面下降也不可再加水定容； 
第8步：将配得的溶液转移至试剂瓶中，贴好标签；

  

举例3：配制500mL，0.1mol/L碳酸钠溶液步骤及注意事项

 

所需的仪器：烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒

步骤：

第一步：计算：所需碳酸钠的质量=0.5*0.1*106=5.3克；

第二步：称量：在天平上称量5.3克碳酸钠固体，并将它倒入小烧杯中；

第三步：溶解：在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使其溶解；

第四步：移液：将溶液沿玻璃棒注入500mL容量瓶中；

第五步：洗涤：用蒸馏水洗烧杯2～3次，并倒入容量瓶中；

第六步：定容：倒水至刻度线1～2cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直；

第七步：摇匀：盖好瓶塞，上下颠倒、摇匀；

第八步：装瓶、贴签；

 

误差分析：

固体药品的称量与液体药品的量取是否准确；

把溶液向容量瓶中转移，溶液洒了；

未洗涤烧杯和玻璃棒；

用待配液润洗了容量瓶；

定容时水加多了或加少了；

定容时未平视刻度线。

仰视、俯视对溶液浓度有何影响？

★俯视刻度线，实际加水量未到刻度线，使溶液的物质的量浓度增大；

★仰视刻度线，实际加水量超过刻度线，使溶液的物质的量浓度减小。

 

市售盐酸密度1.19，质量分数36%～38%

以37%计算：

步骤：

1.计算：

假若需要2mol/L的硫酸100mL，则需37%浓硫酸16.6mL；

计算过程如下：假设盐酸VmL：

（0.1L*2mol/L*36.5g/mol）/37%=V/1.19

V=16.59mL,考虑到量筒的精确度0.1mL，故取16.6m

L即可。

2.量取：

16.6mL浓硫酸；

3.溶解：

把16.6mL浓硫酸倒入已经加入蒸馏水的小烧杯中，用玻璃棒不断搅拌。

4.转移：

待溶液冷却后，将溶液沿玻璃棒倒入100毫升的容量瓶中。

5.洗涤：

再用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次，并将全部洗液移入容量瓶中。

6.定容：

向容量瓶内加蒸馏水，当液面接近刻度线1-2厘米处时，改用滴管滴加蒸馏水到一面恰好与刻度线相切。

7.摇匀：

塞上瓶塞，反复颠倒容量瓶数次，使瓶内的溶液均匀，此时可以把溶液倒入到试剂瓶中贴标签保存。完成配制过程

 

容量瓶的使用六忌：

 

1.忌用容量瓶进行溶解（体积不准确）

2.忌直接往容量瓶倒液（洒到外面）

3.忌加水超过刻度线（浓度偏低）

4.忌读数仰视或俯视（仰视浓度偏低，俯视浓度偏高）

5.忌不洗涤玻璃棒和烧杯（浓度偏低）

6.忌标准液存放于容量瓶（容量瓶是量器，不是容器）

 

1 mol/L的氢氧化钠溶液250mL，完成下列步骤：

①用天平称取氢氧化钠固体/克。

②将称好的氢氧化钠固体放入烧杯中加少量蒸馏水将其溶解，待完全溶解后将溶液沿玻璃棒移入250mL的容量瓶中。

③用少量蒸馏水冲洗2～3次，将冲洗液移入容量瓶中，在操作过程中不能损失点滴液体，否则会使溶液的浓度偏低。

④向容量瓶内加水至刻度线1～2cm时，改用胶头滴管小心地加水至溶液凹液面与刻度线相切，若加水超过刻度线，会造成溶液浓度偏低应该重新配制。

⑤最后盖好瓶盖，摇匀，将配好的溶液移入试剂瓶中贴好标签。

 

常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）：

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10mL。分装成小份贮存于-20℃。

 

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10mL。分装成小份贮存于-20℃。

 

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

 

10mg/mL牛血清蛋白(BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5mL水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

 

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4mL水，分成小份贮存于-20℃，或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加0.65mL的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

 

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100mL。

 

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100mL。

 

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90mL水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100mL。

 

0.5mol/L EDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

 

1mol/L HEPES：

将23.8gHEPES溶于约90mL的水中，用NaOH调pH（6.8～8.2），然后用水定容至100ml。

 

1mol/L HCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

 

25mg/ml IPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

 

1mol/LMgCl2:

溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100mL。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

 

20mg/mL蛋白酶K（proteinase K）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5mL水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

 

10mg/mL R-nase（无D-Nase）（D-Nase－freeR-Nase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1mL的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）

 

5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100mL。

 

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

 

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

 

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100mL。

 

100％三氯乙酸（TCA）：

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100mL水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

 

2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF），用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

 

100×Denhardt试剂（Denhardt'sregent）

成分及终浓度	配制100mL溶液各成分用量
2%聚蔗糖（Ficoll，400型）  2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）  2%BSA（组分V）  水	2g  2g  2g  加水至总体积为100mL

依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standardDNA ligase buffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L  Tris-HCl  100mmol/L MgCl2  100mmol/L DTT  2mmol/L ATP  5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）  0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）  水	5ml  1mol/L 贮液  1ml 1mol/L 贮液  1ml 1mol/L 贮液  200ul 100 mmol/L 贮液  50ul 1 mmol/L 贮液  0.5ml 10 mg/mL 贮液  2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。

 

100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，—80℃可贮存至少6个月。

 

10mmol/L dNTP混合液

成分及终浓度	配制20μL溶液各成分的用量
10mmol/L  d ATP  10mmol/L d CTP  10mmol/L d GTP  10mmol/L d TTP  水	2μL  100 mmol/L d ATP 贮液  2μL 100 mmol/L d CTP 贮液  2μL 100 mmol/L d GTP 贮液  2μL 100 mmol/L d TTP 贮液  12μL

 

20％PEG8000/2.5M NaCl

成分及终浓度	配制10mL溶液各成分的用量
质量浓度为20％聚乙二醇；  2.5mol/L 氯化钠 水	20g，50mL 5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠；  补足100mL

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100mL，用磁力搅拌器搅拌溶解。

 

20×SSC

成分及终浓度	配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L  柠檬酸三钠（二水）  3mol/L 氯化钠  水	88.2g  175.3g  补足1L

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

 

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100μL DEPC 于100mL水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionized formamide）
直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

 

磷酸缓冲液（phosphate buffer）
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L；1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液：溶解142g于足量水中使终体积为1L。

 

电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

 

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度	配制1L溶液各成分的用量
2mol/L  Tris碱  1mol/L 乙酸  100 mmol/L EDTA  水	242g  57.1 mL的冰乙酸（17.4  mol/L）  200mL的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）  补足1L

 

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度	配制1L溶液各成分的用量
445  mmol/L Tris碱  445 mmol/L 硼酸盐  10 mmol/L EDTA  水	54g  27.5g 硼酸  20 mL的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）  补足1L

 

染料

1％溴酚蓝（bromophenolblue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

 

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

 

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

 

凝胶上样液（gel loading solutions）
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度	配制10mL溶液各成分用量
0.3  N 氢氧化钠  6 mmol/L EDTA  18％聚蔗糖（400型）  0.15％溴甲酚绿  0.25％二甲苯青FF  水	300μL 10N 氢氧化钠  120μL 0.5mol/L EDTA（pH8.0）  1.8g  15mg  25mg  补足到10mL

 

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度	配制10mL溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝  0.15％二甲苯青FF  5 mmol/L EDTA  15％聚蔗糖（400型）  水	1.5mL  1％溴酚蓝  1.5mL 1％二甲苯青FF  100μL 0.5mol/L EDTA（pH8.0）  1.5g  补足到10mL

 

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度	配制10mL溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝  0.25％二甲苯青FF  15％聚蔗糖（400型）  水	2.5mL  1％溴酚蓝  2.5mL 1％二甲苯青FF  1.5g  补足到10mL

 

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度	配制10mL溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝  0.15％二甲苯青FF  5 mmol/L EDTA  50％甘油  水	1.5mL  1％溴酚蓝  1.5mL 1％二甲苯青FF  100μL 0.5mol/L EDTA（pH8.0）  3mL  3.9mL

 

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度	配制10mL溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝  0.15％二甲苯青FF  5 mmol/L EDTA  40％聚蔗糖  水	1.5mL  1％溴酚蓝  1.5mL 1％二甲苯青FF  100μL 0.5mol/L EDTA（pH8.0）  4g  补足到10mL

 

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度	配制10mL溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝  0.2％二甲苯青FF  200 mmol/L EDTA  0.1％SDS  50％甘油  水	20mg  20mg  4mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)  100μL 10% SDS  5mL  补足到10mL

 

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