CHO稳定细胞株筛选方法

2.1 宿主细胞选择

工业上主要使用两大类CHO 细胞：① GS野生型，含弱的GS活性（GS WT）：CHO-K1（ATCC CCL-61，ECACC 85051005），CHOK1SV（lonza)；② GS缺陷型，敲除GS活性（GS KO）：CHOK1SV-KO（Lonza),CHOZN（Merk）,HD-BIOP3(Horizon)。

使用这些商业化的细胞株，需要支付高额的专利费用。普健生物凭借近十年的抗体药物研发项目经验，自主开发了CHO-GS KO细胞系及GS载体系统，经过大量的重组表达项目验证，产量高达3g/L以上，稳定性好。

2.2 细胞株筛选方案

① 重组载体构建。选择适合的信号肽，对抗体重轻链基因进行密码子优化。将目的基因构建到普健专有的GS载体上。

② 转染及Minipools筛选。使用普健生物专利的CHO细胞转染方法进行转染。转染48h后，加压筛选Minipools。利用Elisa 或Octet进行初筛，选取最优的30个minipools，逐级扩大培养至TPP摇管中，利用简单的流加表达工艺筛选出3株最优的minipools。

③ 细胞株单克隆化。采用特定的有限稀释方法铺板，Imager跟踪成像。利用Elisa或Octet进行初筛，选取最优的30个monoclones，逐级扩大培养至TPP摇管中，利用简单的流加表达工艺筛选出10株最优的monoclones。将10株最优的monoclones传至摇瓶中，利用特定的摇瓶工艺对10株monoclones 进行细胞生长特性，代谢特性，产量，抗体糖基化修饰，抗体聚体等质量分析，综合筛选出最优的3株生产用细胞株。

④ 个性化产量优化和糖型调节。普健生物有多种基础培养基，补料培养基及流加表达培养方案。可以根据不同的细胞株生长特性， 筛选出最优的流加表达工艺。同时，也可以用特定的调糖培养基调节不同的糖型的比例。

⑤ 完善的抗体质量评估系统。主要包括抗体效价，活性分析；抗体聚体分析；抗体糖基化分析；抗体效能分析等。

⑥ 生产细胞株稳定性分析。包括基因型稳定性分析及30个代次的传代稳定性分析。