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小鼠肠系膜动脉注射的基本操作过程及注意事项
肠系膜动脉是分布于消化管的动脉,主要分为肠系膜上动脉和肠系膜下动脉,结合小肠结构图来看,肠系膜上动脉分布于小肠左侧,肠系膜下动脉分布于结肠、大肠及泄殖腔部位,因此通过该方法可以感染小肠及结肠部位的细胞。
具体方法如下(来源于参考文献[1,2,5]):
a.  保定完成后使用异氟醚麻醉小鼠;
b.  通过左上方的皮肤进行1-2 cm的穿刺沿着腋线和侧腹的脾脏区域。切开腹外斜肌暴露SMA(肠系膜动脉)。使用微型牵开器将皮肤和腹壁固定,并用温暖的盐水纱布覆盖小肠防止回缩;
c.  使用微血管放大器在放大20倍的情况下,将SMA轻轻地从腹膜后剥离,在近端伤口周围放置连接注射针,使用一个微型血管钳暂时夹闭血管腹主动脉;
d. 将定制33号1/2'’英寸点式2型进样针(Hamilton; Reno, NV))连接250 μl汉密尔顿TLL气密性进样针注射器插入肠系膜动脉,轻轻结扎血管保持稳定防止注射泄漏,随后进行病毒注射;
e.  注射结束后取下注射器械,解除夹闭,使血液流回肠道组织。
肠系膜动脉注射示意图
最后,小编对肠道系统的AAV注射方法及剂量进行总结,大家可以根据自己需求进行选择预实验的参考剂量,设置梯度,选择最佳剂量:
肠道系统AAV感染范围及剂量参考
注射方法
感染部位
参考剂量
注射体积
尾静脉注射
全身大部分器官、血液系统
>2E11vg/只
小鼠100-200μl
灌肠
结肠更易感(少量肠上皮细胞感染)
4E10vg-1E11vg/只
小鼠200μl
大鼠700 μl
腹腔注射
腹腔肠道平滑肌、浆膜感染
(无上皮细胞感染)
>1E11vg/只
50-100μl(不超过10 μl/g)
肠系膜动脉注射
肠系膜上动脉
小肠左侧(可感染上皮细胞)
5E10vg-1E11vg/只
100-200μl
肠系膜下动脉
结肠(更易感)、大肠、泄殖腔(可感染上皮细胞)
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