慢病毒载体的世代

使用慢病毒载体进行基因转移也不能免除风险，因为病毒基因组材料可以整合到宿主DNA中。这可以通过导致这些基因的抑制或过度表达和插入突变来干扰宿主细胞基因的功能。随着技术的进步和生物安全风险的发现，设计了具有增强安全功能的新一代慢病毒载体。这些代在接下来分别描述，理解为“代越高，载体越安全”。在所有三代中，包膜基因通常是异源的，即来自不同的病毒，例如VSV-G（不是HIV基因）。

第一代：包括一个包装系统，除了包含在另一个载体中的env基因（通常是异源的）之外，所有的HIV基因都包含在包装系统中。

第二代：研究人员发现，在永生化细胞系中，HIV复制不需要4种HIV辅助基因—vif、vpr、vpu和nef—。这导致了第二代载体的工程化。在该系统中，去除了4个辅助基因，留下了gag和pol阅读框以及tat和rev基因。一般来说，具有野生型5'LTR的慢病毒载体需要第二代包装系统，因为它们需要tat激活。

第三代/自灭活(SIN)：在第三代载体中，3'LTR被修改，tat被剔除，rev在单独的质粒中提供。由于5'LTR中的HIV启动子依赖于tat，因此没有tat的载体需要将其野生型启动子替换为异源增强子/启动子以确保转录。这种启动子可以是病毒（如CMV）或细胞（如EF1-α）。

慢病毒载体世代汇总表

*形成RCL的风险不仅存在于慢病毒载体生产过程中，而且存在于涉及感染野生型HIV的材料的实验中。慢病毒载体与HIV之间的重组可导致产生安全性未知结果的新病毒。出于这个原因，涉及未经HIV筛查的人体材料的实验对实验室工作人员构成了更大的风险。