慢病毒检测方法
在293T细胞株中对纯化的慢病毒进行滴度测定,常用有4种方法进行慢病毒滴度测定,分别是:
➤通过ELISA对病毒颗粒中的p24蛋白进行检测; ➤通过定量PCR对病毒颗粒的RNA进行检查;
➤通过定量PCR对整合到基因组DNA中的病毒序列进行检测;
➤通过FACS对荧光蛋白的表达水平进行检测。
但前两种方法并不能区分病毒颗粒是否有活性,因此测定所得的滴度往往比后两种方法高一至两个数量级。后两种方法测定的是有效的病毒滴度,因此更有意义。由于并非所有的病毒载体中都含有荧光蛋白,此外,荧光蛋白的表达有时候还受启动子及表达的目的基因影响,因此过定量PCR对整合到基因组DNA中的病毒序列进行检测是最佳方法。
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