牙髓间充质干细胞的分离方法与培养

牙髓干细胞 (dentalpulp stem cells, DPSCs) 的分离培养：

1.将新鲜采集的牙髓，置于10 cm 培养皿中，用DPBS 清洗 3 遍，操作过程

尽量避免污染。

2.接着加入5ml完全培养基(完全培养基的配置：DMEM/F12 + 20% Plus Advanced Growth Supplement (StemBo　Bioscience., Ltd) + 1% L-Glutamine + 1% NEAA + 1% 双抗) 浸润牙髓组织，用无菌手术剪将其剪碎。

3. 将其剪碎组织块固定在培养皿中，于37℃、5% CO2培养箱孵育30min以使组织块黏贴在培养皿壁上。

4.接著于6 cm培养皿中加入2ml完全培养基。

5.48 h 换液，此后每 3到4天更换 1 次完全培养基。培养约 10 ~ 14 天会有细胞从组织块中爬出，细胞达到80% ~ 90%后，用胰酶-EDTA或TrypLE在 37℃消化，按1:3 比例传代。