牙髓MSC传代与培养方法

1. 吸弃培养皿中的培养基，加入适量 DPBS 轻轻冲洗1次。

2. 根据培养皿适量加入胰酶-EDTA，于37℃、5% CO2培养箱作用2~3min，用

吸管吹打培养皿底部，镜下观察细胞完全脱落后。

3. 根据胰酶-EDTA使用量加入完全培养基，与细胞混和均匀再1200×rpm离心3~5min。

4. 谨慎吸出上清，细胞团块用3ml~10ml完全培养基悬浮后，混匀细胞悬液。

5. 按照1:3~1:4的比例进行传代或按照30000~60000/ml的细胞密度将细胞接种至T25或  T75培养瓶或其它培养器皿中传代培养，放入37℃、5% CO2培养箱内培养。

6.  每2天更换一次培养基，培养2~4天，待细胞融合度达到80%左右时，参照操作步骤1~3收获细胞。

7. 细胞冻存：将细胞团块悬浮于适量 (0.5~1×106cell/ml) 牙髓MSC冻存液 (90% Plus Advanced Growth Supplement + 10% DMSO) 2~8℃冰箱放置30min，-80℃冰箱放置24h，转入液氮罐冻存。

＊鉴定分析：利用流式分析仪鉴定  CD73 和 CD90