VSV假病毒包装原理及操作步骤

原理

对于有囊膜的病毒，其侵入细胞的过程是由其囊膜蛋白决定的，因为囊膜负责识别靶细胞表面的受体并启动吸附和穿入的过程。此外，当两种病毒同时感染一种细胞时所发生的表型混合现象提示一种病毒的囊膜能够整合到另外一种不同病毒的颗粒表面。基于以上两点，在研究病毒侵入细胞的过程及其组织嗜性和受体等方面产生了一种新的技术——假病毒技术。目前的假病毒则是指一种反转录病毒能够整合另外一种不同种类病毒的囊膜糖蛋白，从而形成的具有外源性病毒的囊膜，而基因组保持着反转录病毒本身基因组特性的病毒。假病毒颗粒（pseudoviral particles）——由包装细胞提供的病毒蛋白携带包裹着外源基因的病毒载体重组体，对靶细胞只有一次感染的能力，为复制缺陷型，感染后不能产生新的病毒颗粒。这种病毒虽然可以侵入细胞，但是在入侵细胞后由于是复制缺陷型，而且组装成病毒的结构蛋白是外源提供的，不能够进行病毒的自我复制，所以非常安全。

水疱性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）载体在研究病毒颗粒入侵宿主细胞、辨认介导病毒感染细胞的细胞表面受体、筛选病毒抑制药物以及疫苗开发方面有着广泛的应用。VSV病毒载体可以高效地利用异源病毒的包膜蛋白进行假型化（Presudotypted），比如那些需要在高生物安全等级实验室操作的病毒的包膜蛋白。

重组VSV是G糖蛋白基因缺失的，该缺失导致VSV自我复制缺陷的。G糖蛋白基因通常被替换为报告基因（如荧光蛋白基因、荧光素酶报告基因或分泌型碱性磷酸酶基因）用于病毒的转导效果测定。

基本操作步骤：

生产VSV假病毒主要由三个步骤构成：1. 使用质粒初步制备VSV；2. 扩增G糖蛋白补全的VSV；3. 使用异源病毒的包膜蛋白组装VSV假病毒。