Tunel染色实验技术服务

【技术原理】

        细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180~200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素、生物素标记的dUTP，从而可以通过荧光显微镜或化学显色方法检测细胞凋亡的情况。

【实验流程】

【常见问题】

1、无/弱染色

     烤片温度过高，推荐56℃-60℃1-2h；
            一抗是否适用固定液和石蜡切片，使用浓度是否过低，孵育是否时间过短等。

2、染色过深

     染色试浓度过高或孵育时间过长；

     显色剂浓度过高或孵育时间过长。

【注意事项】

1、洗涤蛋白酶K时，一定要PBS冲洗3次，如果冲洗不净会严重干扰后续的标记反应；

2、3%的过氧化氢溶液孵育时间不应过长，否则会出现过氧化氢导致的DNA断裂，产生假阳性；

3、滴加TUNEL检测液时，可利用防蒸发膜防止其蒸发影响样本的生物素标记；配制好的DAB显色液必须一次性使用完毕，不宜冻存。