随着实验室细胞培养的发展,除了原代培养之外,人工开发出来的细胞系的保存越来越重要。冷冻保存细胞系的优点如下:1、减少基因漂移;2、减缓细胞系的衰老;3、稳定表型;4、减少微生物污染及交叉污染机会等。细胞冷冻的原理在于尽可能降低细胞内的晶体形成,减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤,从提高细胞复苏时的存活率。细胞冻存的数量应保证复苏时低温保护剂获稀释,稀释后的细胞浓度扔高于正常传代的细胞浓度为宜,这是因为当低温保护剂稀释以后,该浓度一般不会对细胞造成毒性损伤。
通用细胞冻存液主要由FBS、DMSO等组成,是非常经典的一种无菌冻存液。用于各种哺乳动物原代细胞、传代细胞系、杂交瘤细胞等的冻存。
细胞冻存液操作步骤:
按照常用方法悬浮细胞或贴壁细胞收集于离心管中。
1000rpm-1500rpm,5min离心,弃上清液。
加入适量的Serum-Free细胞冻存液于离心管中,推荐细胞冻存浓度为 1×106 - 1×107 cells/ml。缓慢混合均匀,制成细胞悬液。
将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。
直接将冻存细胞放入-80℃冰箱,24h后转入移至-196℃液氮罐长期冷冻保存。
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