细胞冻存液操作步骤详解

随着实验室细胞培养的发展，除了原代培养之外，人工开发出来的细胞系的保存越来越重要。冷冻保存细胞系的优点如下：1、减少基因漂移；2、减缓细胞系的衰老；3、稳定表型；4、减少微生物污染及交叉污染机会等。细胞冷冻的原理在于尽可能降低细胞内的晶体形成，减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，从提高细胞复苏时的存活率。细胞冻存的数量应保证复苏时低温保护剂获稀释，稀释后的细胞浓度扔高于正常传代的细胞浓度为宜，这是因为当低温保护剂稀释以后，该浓度一般不会对细胞造成毒性损伤。

通用细胞冻存液主要由FBS、DMSO等组成，是非常经典的一种无菌冻存液。用于各种哺乳动物原代细胞、传代细胞系、杂交瘤细胞等的冻存。

细胞冻存液操作步骤：

• 按照常用方法悬浮细胞或贴壁细胞收集于离心管中。

• 1000rpm-1500rpm，5min离心，弃上清液。

• 加入适量的Serum-Free细胞冻存液于离心管中，推荐细胞冻存浓度为 1×106 - 1×107 cells/ml。缓慢混合均匀，制成细胞悬液。

• 将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。

• 直接将冻存细胞放入-80℃冰箱，24h后转入移至-196℃液氮罐长期冷冻保存。