外泌体是什么？外泌体检测方法

外泌体是什么？
外泌体（exosome）是是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。从细胞中提取外泌体后可以通过透射电镜来分析exosome的大小、形态等，再经过Western Blot可以分析特定蛋白在exosome中的表达情况。外泌体中的蛋白、RNA和脂肪成分特异，并且携带了一些重要的信号分子，其在多种疾病的早期诊断中发挥着重要的作用。
 
如何提取外泌体？
外泌体的提取方法有很多，例如超速离心法、密度梯度离心、超滤离心、PEG-base沉淀法、磁珠免疫法和试剂盒提取。实验室常用的提取方法是如下两种：
 
1、超速离心法（差速离心）
超离法是常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行（如图所示），可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定（可能与转子类型有关），纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。
 
2、试剂盒提取
近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒，有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分，有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化，也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。这些试剂盒不需要特殊设备，随着产品不断更新换代，提取效率和纯化效果逐渐提高，因而逐渐取代超速离心法并推广开来。有些试剂盒操作简便，不用超速离心，同时可获得高纯度和高回收率的外泌体。
 
 
外泌体粒径分析、浓度检测
外泌体粒径分析方法为纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle tracking Analysis, NT A)，其原理是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，结合 Stockes-Einstein 方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NT A技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。相较于其他表征方式，NT A技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。