MTT试剂溶液的配制方法—贴壁细胞

1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔参入100ul，铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。

⒉、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板），参入浓度梯度的**，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前**下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度，每孔100ul，设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况

⒊、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

4、每孔参入20ulMTT试剂溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若**与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再参入含MTT的培养液。

5、终止培养，小心吸去孔内培养液。

6、每孔参入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联**检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的**溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）