过表达细胞株技术介绍

基因过表达细胞株技术背景

许多研究者在研究基因功能时，会同时进行基因干扰和基因过表达，让实验结论更严谨。基因过表达是指通过慢病毒、电转等细胞转染方式，在细胞内提高特定基因的表达水平，从而实现基因的功能增强（gain of function），基因过表达作为一种传统的分子生物学技术至今依然在生物学研究中发挥着重要作用。

基因过表达实验流程与周期示意图

成功案例

项目名称：构建mMaf基因过表达的小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）

1、mMaf慢病毒过表达载体设计：

2、病毒包装

将上述表达载体包装慢病毒并进行滴度检测，确保病毒质量满足后续实验要求。

3、小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）鉴定

细菌、真菌、支原体等检测，确保小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）无微生物污染；

4、病毒转导稳转株构建

mMaf过表达慢病毒和阴性空载慢病毒转小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7），并使用嘌呤霉素药筛，最终获得1株过表达稳转细胞株和1株对照组稳转细胞株。细胞株各冻存2管，

细胞量1×106/管。细胞分组如下：

过表达组- Pn+4 -100x

对照组- Pn+4 -100x

5、qPCR 检测

mGapdh的溶解曲线

mMaf的溶解曲线

相对定量的方法检测目的基因的表达变化，按照2-ΔΔCT法对数据进行分析处理

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