哺乳动物基因表达MSCV载体

　　MSCV（Murine stem cell virus，鼠干细胞病毒）逆转录病毒载体系统是一种非常高效的、能在胚胎干细胞（ES）、胚胎癌细胞（EC）、造血干细胞（HS）及其他哺乳动物细胞系中大量表达目的基因的病毒工具。

　　MSCV逆转录病毒载体衍生于MESV和LN两种逆转录病毒载体，这两种载体分别是基于鼠PCC4细胞骨髓增生性肉瘤病毒 （PCMV）和莫洛尼鼠白血病病毒（MMLV）。MSCV包含一个延伸的杂合包装信号，该信号源于LN载体，同传统的逆转录病毒载体相比，病毒滴度更高。此外，MSCV逆转录病毒载体包含PCMV病毒来源的经过设计的5’LTR，有助于靶基因在ES细胞、EC细胞等多能细胞系中的转录激活，克服了目的基因在此两种细胞中抑制性表达的现象，而该现象通常能在MMLV逆转录病毒载体中观察到。

　　MSCV逆转录病毒载体首先构建成大肠杆菌质粒。随后同辅助质粒一起被转染到包装细胞中。在包装细胞内，位于两个长末端重复序列（LTRs）之间的载体DNA转录成RNA，辅助质粒表达病毒蛋白将RNA包装成病毒。之后，活病毒分泌到上清中，可用于直接或者浓缩后感染靶细胞。

　　将病毒加入靶细胞后，RNA穿梭进入细胞，反转录成DNA并随机整合到宿主基因组中。载体构建时插入两个LTRs之间的序列随同其余病毒基因组被永久整合到宿主DNA中。