SARS-Cov-2突刺(Spike)糖蛋白通过结合宿主细胞表面ACE2受体感染宿主。利用过表达hACE2的293T细胞株与新型冠状病毒S蛋白重组假病毒系统,模拟新冠病毒感染并进入人体的过程,是一种非常有效实用的策略。而且研究人员可以在P2实验室(BSL-2级)开展该实验,一定程度上缓解了各地P3实验室(BSL-3)资源紧张的局面,使病毒研究实验的迅速开展成为可能。
SARS-Cov-2突刺(Spike)糖蛋白通过结合宿主细胞表面ACE2受体感染宿主,是研发诊断性抗体、治疗性抗体、疫苗和诊断方法的关键靶标。S蛋白重组病毒(Pseudovirus)是一类重组改造反转录病毒,能够整合其他病毒囊膜糖蛋白来形成外源性病毒囊膜, 但仍可保持自身基因组特性。
S蛋白重组假病毒与新型冠状病毒有相同感染机制,但却不具备致病性,因此能安全可靠地实现大规模的表达和生产。这让研究人员可以在不依赖于BSL-3实验室的条件下,利用新型冠状病毒S蛋白重组假病毒和293T/hACE2细胞建立细胞检测系统和高通量抗体筛选平台。
293T/hACE2细胞系经过了严格的质量控制,包括细胞活力、无菌检测、支原体检测以及ACE2表达活性等。
293T/hACE2细胞系的特点
稳定可靠。
感染机制与新冠状病毒相同,但不致病。
能够在BSL-2实验室基础上实现规模化生产和筛选。
无菌性、支原体和ACE2活性检测。
细胞处理
1)复苏细胞:将含有2mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL 培养基混合均匀。在1000rpm 条件下离心5 分钟,弃去上清液,补加4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入10cm 皿中培养过夜,培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
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