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2021.09.17
采用噬菌体介导的同源重组进行基因敲除:首先构建同源交换位点(AES),随后将其整合到海分枝杆菌噬菌体基因组中,获得噬菌粒(phasmid);将噬菌粒导入耻垢分枝杆菌,获得整合有同源交换位点的重组噬菌体,经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体,对海分枝杆菌进行转染;将转染后的海分枝杆菌涂布到含潮霉素抗性的固体培养基上,30℃培养2-3周,挑取单克隆,通过PCR等方式进行验证。
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