是时候继续填信号通路是什么鬼第一季的文献篇了
，看了看大概还差个三四篇吧。今天就讲一讲FoxO信号通路的文献吧
……
FoxO信号通路，我估计你们都已经把我讲的忘光光了
，FoxO信号通路
，其实经常作为PI3K/AKT信号通路的下游，AKT磷酸化激活后，会使得FoxO磷酸化，导致被降解抑制，差不多就是这样
。今天看的这篇，是NC上的文章
：
要说NC吧，大家都觉得是高分灌水
，但实际上，我看了看这篇文章，含金量其实不低
。
首先由于PTEN的表达对于肿瘤抑制起到了比较重要的作用
，那为啥会起作用呢？
如果记得夏老师讲的PI3K/AKT信号通路的话，
可能会记得PTEN是通过逆转PIP3形成，来阻止AKT激活的
。
于是他们对PTEN的稳定性做了个初步的分析
，第一步他们做了个AlphaScreen
：
那啥是AlphaScreen呢
，这里用这个要做啥呢？AlphaScreen是一种技术，通过包埋抗体的两种小珠，用类似夹心法结合底物
，比如一个结合AKT，另一个结合AKT的磷酸化位点
，两个小球接近后就可以激发产生荧光
：
为了研究PTEN的稳定性
，他们分析的是PTEN的去泛素化酶对PTEN下游AKT磷酸化激活的影响
。也就是从上游，用去泛素化酶的siRNA库的敲减细胞，然后用AlphaScreen看下游AKT磷酸化情况
。由此，他们找到一个去泛素化酶——USP11
。
这种去泛素化酶
，对于PTEN的维持，有很大的影响，敲减或者突变后，PTEN就会被泛素化
，无法稳定表达了：
接着，他们验证了USP11对于表型的影响
：
也就是USP11缺失后
，会促进肿瘤生长：
于是他们做了与PTEN相关的实验验证
：
检测PTEN缺失后
，过表达或者敲减USP11，分析对表型的影响。虽然，PTEN缺失后过表达USP11，表型无变化，基本可以说明USP11对于PTEN的依赖性。但是缺失PTEN后，敲减USP11，感觉有点画蛇添足……因为PTEN作为下游不表达，而上游敲了USP11……是为了看他表达量更低么？（可能只是为了单纯的做完互补实验的验证）接着是临床样本中，二者的表达相关性，高表达USP11的
，也会高表达PTEN（
不知道有谁还记得米勒五法中的共变法）：
接着他们分析了高密度生长和低密度生长情况下PTEN的表达和维持
，这里用来CHX（
蛋白合成抑制剂），抑制蛋白合成后，就是为了看蛋白的泛素化降解情况
：
差不多就是高密度生长情况下
，PTEN蛋白会维持更久，这可能和USP11是密切相关的
。而USP11的表达，又受到了转录因子的影响
，这个转录因子就是FoxO（
终于到FoxO了，要是不记得这个通路的话，建议好好回忆回忆）。这里就分析了FoxO对于USP11启动子的影响，做了ChIP和Luciferase（
反正他们真的是不怕烧钱，实验管够）：
如果还记的FoxO信号通路的话，可能还记得FoxO信号通路中
，当FoxO入核后，还有一个乙酰化的过程
，乙酰化的FoxO活性会减弱，而去乙酰化，需要SIRT1的参与
：
于是他们用白藜芦醇（促进SIRT1介导的去乙酰化）以及敲减SIRT1
，来对USP11以及PTEN的表达进行分析
，发现FoxO在某种程度上确实能激活下游的USP11的mRNA表达，
借此维持PTEN的蛋白表达：
但理论上PTEN又是FoxO的上游
……如果你们还记得的话，是PTEN抑制AKT磷酸化，AKT磷酸化被抑制才能使得FoxO入核激活转录
。于是他们分析了PTEN缺失后（
这里还用了PI3K的抑制剂以及PTEN的抑制剂进行互补实验），FoxO的磷酸化情况（
FoxO被AKT磷酸化后，即会泛素化降解）：
这个结果就是个很有意思的结果——我生我自己
……这就是个正反馈通路
……
PTEN通过逆转PIP3的形成
，抑制了AKT的激活。没有激活的AKT无法使得FoxO磷酸化后被降解
，也就算PTEN间接促进了FoxO的入核转录激活，而FoxO会激活USP11的表达
，USP11则会抑制PTEN的降解。以此循环下去
……
好吧，这篇十分的文章做得其实还是蛮有意思的
，不像之前的一些文章在上下游验证过程中的顾此失彼
，这次在上游、中间、下游三者的影响上
，都基本上做得算是比较完整的论证，而最终又形成了一个上下贯通的正反馈通路。当然，钱也没少烧
。有兴趣的话，可以自己去下载了看看，PMC上都是有全文的
。或者，回复“
公克”（
不要在评论区回复），要么就星球上见（
当然进不去也无所谓）。好了，今天就先策到这里吧，祝你们心明
眼亮
。
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