结直肠癌是消化内科疾病中发病率最高的恶性肿瘤性疾病，近年来其发病年龄越来越趋于年轻化，且发病率逐年稳步上升，且发现晚[1]。慢性炎症已被公认为多种癌症的重要危险因素，癌变发生的各个阶段都受到炎症反应的影响，肠道炎症是已知的结直肠癌危险因素，炎症过程在结直肠癌的发展中起着重要的作用，且患有结肠炎的患者患上结肠癌的风险更高[2-4]。肠道组织中的细胞因子网络是组织稳态和炎症的关键介质，白细胞介素（interleukin，IL）在结直肠癌的发生机制中发挥中介作用[5]。炎症相关性结直肠癌（colitis associated cancer，CAC）是与炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）相关的结直肠癌亚型，由长期反复的肠道炎症所引起[6-7]。
氧化偶氮甲烷（azoxymethane，AOM）/葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate，DSS）模型是一种可重复性高且相对便宜的CAC动物模型。AOM是一种致癌物，它可以通过细胞色素P450（cytochrome P450，CYP）以及同工酶CYP2E1代谢，转化为甲基苯丙醇，这是一种高活性的烷基化物种，可诱导DNA产生O6-甲基鸟嘌呤化合物导致G→A转变[8]，在排入胆汁后，可被结肠上皮细胞所吸收并诱发DNA损伤。DSS是一种类似肝素的多糖，可对结肠上皮细胞造成损伤，并诱发结肠炎，从而模仿IBD的病理特征[9]。AOM/DSS模型的主要特点是造模时间短和对CAC的精确建模，肿瘤的发展可以在短至10周内发生。此外，AOM/DSS诱导的肿瘤组织病理学能很好地模拟人类CAC的发生发展过程，如远端肿瘤及浸润性腺癌[10-13]。
近年的研究表明中医药干预结直肠癌具有一定的效果，也有越来越多的中草药应用于结直肠癌的研究。槲皮素和表儿茶素为常见的类黄酮，二者具有结构相似性，存在多种中药中，具有抗氧化、抗炎及抗肿瘤功效。文献报道槲皮素和表儿茶素联用有很好的协同抗氧化、抗炎等作用[14-17]。本研究旨在通过研究槲皮素和表儿茶素协同作用及机制，以期为临床结直肠患者的用药及治疗提供新方向。
如图1-A所示，与对照组比较，模型组小鼠结直肠纵面可看出具有大量肿瘤浸润；与模型组比较，单独给药组小鼠结肠纵形剖面肿瘤浸润个数减少，联合给药组结肠无肿瘤浸润。如图1-B所示，与对照组比较，模型组肿瘤数量明显升高（P＜0.001）；与模型组比较，各给药组肿瘤数量均显著减少（P＜0.01、0.001）。如图1-C所示，各给药组小鼠结直肠长度无统计学差异。
如图2所示，对照组小鼠肠道黏膜平整，各层组织分界清楚，结构规则，黏膜隐窝结构中可见大量杯状细胞；模型组小鼠结直肠组织结构不规则，没有正常的结构分层，有大量异形细胞浸润，细胞核变大，核深染，腺体结构不规则，杯状细胞减少甚至消失，炎性细胞浸润明显；各给药组结直肠异形细胞少量浸润，炎性细胞较模型组少，肠黏膜结构不完整。
如图3所示，与对照组比较，模型组小鼠结直肠组织中TLR4、IL-1β、IL-17、IL-6的mRNA表达水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，槲皮素组IL-1β和IL-17的mRNA表达水平均显著降低（P＜0.05、0.01），联合给药组和表儿茶素组TLR4、IL-1β、IL-17、IL-6的mRNA表达水平均显著降低（P＜0.05、0.01），且联合给药组较单独给药组作用更为显著。
如图4所示，与对照组比较，模型组小鼠结直肠组织中VEGF和c-myc的mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，槲皮素组、联合给药组和表儿茶素组c-myc的mRNA表达水平显著降低（P＜0.05），联合给药组和表儿茶素组VEGF的mRNA表达水平均显著降低（P＜0.05），且联合给药组较单独给药组作用更为显著。
为了探究槲皮素和表儿茶素防治CAC的协同作用是否与结肠组织中miR-124-3p表达相关，通过生物学信息预测miR-124-3p的靶基因，预测的结果提示miR-124-3p可以靶向IL-6的3’-UTR，靶向序列见图5-A。采用qRT-PCR检测结直肠组织中miR-124-3p的表达，如图5-B所示，与对照组比较，模型组miR-124-3p的表达明显降低（P＜0.05）；与模型组比较，各给药组miR-124-3p的表达均明显升高（P＜0.05）。采用Western blotting检测结直肠组织中IL-6和p-STAT3蛋白表达，如图5-C所示，与对照组比较，模型组IL-6和p-STAT3蛋白表达水平均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组IL-6蛋白表达水平显著降低（P＜0.05、0.01），联合给药组p-STAT3蛋白表达水平显著降低（P＜0.05），且联合给药组较单独给药组作用更为显著。
IBD与结直肠癌的发生发展密切相关，IBD患者比正常人群高出2～3倍的风险患结直肠癌，CAC是由长期肠道炎症引起的一种常见结直肠癌，促炎因子和炎性细胞因子可促进其发生发展[19-20]。AOM是一种化学致癌物，AOM和DSS的联合作用可诱导炎症和结肠肿瘤的发生，本研究表明，肿瘤相关标志物VEGF、c-myc在AOM/DSS诱导的CAC模型小鼠结直肠组织中表达明显升高，提示CAC模型小鼠肠道已经发生了癌变，而单独给药组和联合给药组结直肠组织中肿瘤相关标志物表达较模型组显著降低，且联合给药组肿瘤标志物降低程度明显低于单独给药组。表明槲皮素和表儿茶素协同作用可以抑制结直肠肿瘤的形成。
为了评估肠道炎症反应在癌变过程中的作用，进一步检测炎症相关基因TLR4、IL-1β、IL-17的mRNA表达水平，以明确槲皮素及表儿茶素的抗肿瘤作用是否与其抑制结直肠道炎症相关。本研究结果显示，与对照组比较，CAC模型小鼠肠道炎症相关因子表达增加；与模型组比较，各给药组炎症因子表达明显减少，且联合给药组炎症因子低于单独给药组。表明槲皮素及表儿茶素可以抑制结直肠道的炎症反应。
IL-6在结直肠癌的肠上皮细胞中过度表达，在慢性炎症发展为肿瘤疾病的过程中起着关键的作用，可通过作用于下游STAT3途径参与调控结直肠癌的增殖和转移[21-23]。IL-6能直接作用于肿瘤细胞，诱导下游STAT3表达，进而促进肿瘤增殖或存活，STAT3还可以诱导促进血管生成因子的表达，造成肿瘤侵袭、转移以及免疫抑制[24-25]。miRNA可以通过特异性mRNA结合来沉默特异性mRNA，诱导翻译抑制。研究表明，miRNA在不同类型的癌症中充当抑制肿瘤因子，具有成为癌症的生物标志物以及化疗靶标的潜在用途[26]。
miR-124-3p被作为胃癌、肝细胞癌、膀胱癌等肿瘤发生进展的肿瘤抑制因子[27]。研究表明，miR-124-3p通过靶向IL-4Rα缓解过敏性鼻炎中的炎症反应[28]。本研究通过生物学信息学网站TargetScan预测，IL-6为miR-124-3p的靶基因，同时通过检测结肠组织中miR-124-3p、IL-6和p-STAT3的表达，发现与对照组比较，模型组IL-6、p-STAT3蛋白表达水平明显增加，miR-124-3p mRNA表达水平明显降低；与模型组比较，各给药组IL-6、p-STAT3蛋白表达水平明显降低，miR-124-3p mRNA表达水平明显升高，且联合给药组较单独给药组作用更为显著。
提示槲皮素和表儿茶素协同作用可能通过上调miR-124-3p表达进而抑制结直肠组织中IL-6和p-STAT3的表达，抑制结直肠黏膜炎症细胞浸润，减少结直肠道炎症反应，抑制CAC小鼠的疾病进程。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
参考文献（略）
来 源：张 磊，罗 霄，刘明靓，陈叶梓，袁成福，何毓敏，刘朝奇，周永芹．基于miR-124-3p/IL-6信号通路的槲皮素和表儿茶素协同调节炎症相关性结直肠癌研究 [J]. 中草药, 2023, 54(5):1471-1477.
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