转谷氨酰胺酶（transglutaminases，TG）是一种钙离子依赖性蛋白酶，其中TG3主要存在于表皮和毛囊的角质形成细胞中，参与角质形成细胞分化，同时也是丝聚蛋白连接肽片段的底物，参与维护表皮屏障。与健康对照和特应性皮炎（AD）患者的非皮损区比较，AD患者皮损区TG3蛋白表达明显升高，提示TG3参与AD发病，但具体机制尚不明确。
转谷氨酰胺酶3与树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子体外结合能力研究
苏惠春 罗阳 刘笑纯 韩悦 温禾 姚煦 王宝玺
作者单位：中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病医院过敏及风湿免疫科［苏惠春（现在福建医科大学附属第一医院皮肤科）、罗阳、韩悦、刘笑纯、温禾、姚煦］；中国医学科学院 北京协和医学院 整形外科医院皮肤科（王宝玺）
前期研究显示，作为一种重要的C型凝集素受体，树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子（DC⁃SIGN）可特异性识别糖基结构，从而介导树突细胞（DC）活化和炎症反应。TG3作为一种蛋白酶，应该含有一定的糖基，可能通过DC⁃SIGN受体被DC识别和摄取，从而介导下游免疫反应。苏惠春等检测树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子（DC⁃SIGN）转染的HEK293T细胞和单核细胞来源的树突细胞（MDDC）膜表面DC⁃SIGN受体对转谷氨酰胺酶3（TG3）的识别和摄取能力。
图1 激光共聚焦显微镜观察树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子（DC⁃SIGN）⁃EGFP重组质粒转染的HEK 293T细胞（× 400） 1A：蓝色荧光代表DAPI（4，6-二脒基-2-苯基吲哚）染的细胞核； 1B：绿色荧光代表EGFP（增强绿色荧光蛋白）； 1C：绿色和蓝色荧光的融合
采用脂质体转染的方法将融合有DC⁃SIGN基因片段及真核表达载体pGCMV⁃EGFP（增强绿色荧光蛋白）的质粒转染至HEK293T细胞，制备DC⁃SIGN⁃EGFP⁃HEK293T细胞；通过磁珠阴性分选出外周血中CD14+单核细胞，并通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导获得MDDC。利用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测转染的HEK293T细胞及MDDC上DC⁃SIGN受体对TG3蛋白的识别和摄取，并设立空白对照组（不加入Alexa Fluor⁃647染料标记的TG3）和阴性对照组（仅加入Alexa Fluor⁃647染料）。
TG3与HEK293T和MDDC细胞孵育3 h后，激光共聚焦显微镜及流式细胞仪均显示，TG3可以被HEK293T及MDDC细胞上DC⁃SIGN受体识别并结合摄取入细胞内，流式细胞仪检测显示TG3与MDDC的结合可被DC⁃SIGN 阻断抗体部分阻断。阴性对照组和空白对照组未见HEK293T或MDDC细胞对TG3的识别和结合。
TG3可以作为一种自身抗原被DC⁃SIGN受体识别、结合，并被介导摄取进入树突细胞。
DOI：10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2017.08.008
《中华皮肤科杂志》，2017，50（8）：579-583
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