家禽用去势重组基因载体专利查询/专利号/专利人/发明人查询

家禽用去势重组基因载体，是通过以下方法构建获得的：1)LHRH基因片段的退火人工合成的家禽用去势疫苗基因片段L2：5′-GGCCATGGCTGAGCACTGGTCTTACGGCCTGCAGCCGGGTTAATGAACTCGAGCA-3′终止子XhoI将人工合成的家禽用去势疫苗基因片段的正链和负链，分别用灭菌超纯溶解成浓度为100pmol/l的溶液，各取2μl加入72μl超纯水中混匀，置沸水浴中2min后缓慢冷却至室温，-20℃冻存备用；2)LHRH基因的酶切用NcoI及XhoI对退火后的LHRH基因进行双酶切，酶切产物直接用于连接反应；3)pET-32c质粒的提取、酶切及回收pET--32c质粒的提取后，用NcoI及XhoI对PET-32c质粒进行双酶切；取10μl酶切产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收酶切大片段，置液氮中冻5min，而后置37℃水浴融化，10000r/min离心10min，吸取上清-20℃冻存备用；4)连接DNA连接反应体系如下：PET-32c双酶切回收产物2.5μlLHRH基因酶切产物7.5μlDNALigationKitSolutionI10μl上述混合物16℃反应30min后立即用于转化；5)大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备；6)转化取10μl连接产物转化200μlDH5α感受态细胞，取200μl转化产物涂布含Amp50μg/ml的LB琼脂平板，平板置37℃温箱中培养18小时，挑取转化后的单个菌落，接种含Amp的LB肉汤扩大培养后提取质粒，即为重组质粒。