MC3T3

细胞描述

MC3T3-E1小鼠颅顶前骨细胞。成纤维细胞样，有多个亚克隆，可以作为体外研究成骨细胞分化的良好模型。 从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。 从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。 MC3T3亚克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亚克隆14（ATCC CRL-2594）在抗坏血酸和3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。 它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质（ECM）。 MC3T3亚克隆24（ATCC CRL-2594）和MC3T3亚克隆30（ATCC CRL-2596）在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化。 不形成ECM， 可以作为亚克隆4和14的阴性对照。 矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨钙素（OCN），和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。 高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质，表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1，一种成骨细胞相关转录因子。 植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨，低分化细胞只是产生纤维组织。 这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型，尤其是ECM信号。 它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。

细胞形态

成纤维细胞，贴壁生长

培养条件

a-MEM培养基，10% FBS； 37℃，5%
CO₂，PH值7.2-7.4，无菌恒温培养。

质量检测

本细胞经过检测，不含细菌，真菌以及支原体

产品信息

货号	规格	培养基	运输	保存
XB- MC3T3-E1	2×10^6个/管	a-MEM+10%FBS	干冰或者活细胞寄送	液氮保存

用途

本产品仅供研究使用。

细胞相关操作

细胞复苏（针对液氮冻存细胞）

细胞实验室进行常规消毒，紫外照射30 min以上，超净台开启通风10 min.

细胞培养基(a-MEM +10%
FBS)37℃预热，移入细胞超净台前使用75%酒精擦拭消毒。

从液氮罐中取出细胞冻存管，立即置于37℃水浴中并快速摇动细胞冻存管，使其快速的融化。

在超净台中将冻存管中的细胞移入15ml离心管中，加入3ml新鲜细胞培养基后进行离心。800 rpm, 离心5 min。

在离心等待时间里，在细胞培养瓶（25-cm²）中加入新鲜完全细胞培养基5ml。

离心结束后，弃掉上清，在细胞沉淀中加入1ml新鲜培养基后轻轻地吹打混匀，将细胞移出加入培养瓶中。轻轻地前后左右混匀后，置于细胞培养箱中，37℃，5%
CO₂ 培养。

细胞传代

1.细胞融合度达到90%时，需要进行细胞传代。

2. 细胞实验室进行常规消毒，细胞培养基37℃预热。

3. 在超净台中弃掉细胞培养基，加入5ml 灭菌PBS进行冲洗，弃掉PBS后加入3ml 胰酶，室温或者置于细胞培养箱内37℃消化。

4.显微镜下观察细胞变圆，并且有部分细胞开始脱离皿底时，加入3-5ml细胞培养基（a-MEM+10% FBS）终止消化。

5.用细胞移液器轻轻吹打，将贴附在皿底或者瓶底的细胞吹起并将细胞吹散。

6.将细胞移入离心管中，800 rpm, 离心5 min。

7.离心结束后，弃掉细胞上清，并尽量去除干净。加入1ml完全培养基吹打混匀，取出300 µl细胞悬液接种到培养瓶中（一般按1：3接种。两到三天后传代）。

8. 将培养瓶置于37°C，5%
CO₂的无菌培养箱中培养。

细胞冻存

1. 细胞实验室进行常规消毒，细胞培养基37℃预热。

2. 细胞融合度达到90%，将细胞进行消化，离心重悬后计数。

1)洗净晾干血球计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区；

2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳；

3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色；

4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2；

这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10^-4cm³计数池内，1cm³=1ml，将四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。

5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%。

注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。

3.超净台内将细胞移入离心管中进行离心，800 rpm, 离心5 min。

4.弃掉上清，在细胞沉淀中加入冻存液(a-MEM +20% FBS+10% DMSO),调整细胞密度为2-4×10⁶个/ml.

5.取1-1.5ml细胞悬液移入细胞冻存管中。

6.将装有细胞的冻存管放入冻存盒内，置于-80°C冰箱中过夜，之后可取出并保存于液氮中。若没有冻存盒，可以按照如下程序降温操作：4°C放置半小时，-20°C中放置2 h, 之后置于-80°C冰箱中过夜，最后取出置于液氮中保存。

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