弧菌实用检测方法
一、器材和试剂 (如图A)
电炉一台、培养皿(大)10个、100ml量筒1个、移液管1支、酒精灯1个、三角涂布棒1个、三角烧瓶500ml1个、250ml烧杯1个、天平1个、TCBS培养基1瓶、酒精1瓶,棉布2张。
二、样品采集
1、用无毒塑料瓶采集水下约10cm处水样,采好的水样需盖紧瓶。
2、采得的水样立即送检,否则,应将样品置于冰瓶或冰箱中,但也不得超过24h,否则将影响检验结果。
三、检验步骤
1、倒平板 (如图B)
1) 称量100克TCBS弧菌琼脂粉和1000ml冷却开水,倒入三角烧杯中,加热搅拌,溶解琼脂粉,直至沸腾。
2)在灭菌操作台上,将沸腾后的培养基冷却到50~60℃,分别倒人经灭菌的各培养皿中,每个培养皿约10~12mL,待其冷却凝固,倒置于无菌泡沫箱内保存备用。
注意:倒好的平板内不能有水珠或水层。
2、菌液接种 (如图C)
在灭菌操作台上,取水样(可稀释)0. 05mL,滴入制好的培养皿培养基上,用灭菌的三角涂布棒将菌液涂抹均匀,平放于操作台上数分钟,使菌液渗入培养基。
3、弧菌培养 (如图D)
将接种培养皿倒置灭菌泡沫箱内培养20小时左右,取出计数菌落。
4、菌落计数 (如图E)
分别点数绿色菌落和黄色菌落数量,乘取水样的稀释倍数,即可得该水样的绿色和黄色弧菌总数。
5、废物处理 (如图F)
经计数后不用的培养基,需经灭菌煮溶后,方可到人排水沟。
经常性检测虾塘水体的弧菌密度。要求总弧菌的密度控制在5000菌株/毫升以下,绿弧菌的密度控制在300菌株/毫升以下。
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