一种大蜡螟实验室标准化养殖方法与流程

本发明涉及实验用昆虫养殖技术领域，尤其是涉及一种实验资源---大蜡螟实验室标准化养殖方法 。

背景技术：

蜡螟 （Galleria mellonella）属鳞翅目、螟蛾科、蜡螟亚科昆虫，为完全变态昆虫，生活史包括卵、幼虫、蛹和成虫四个发育阶段。蜡螟幼虫以巢脾为食，对养蜂业危害较大，此外还会危害毛皮和植物，常见危害蜂群的有大蜡螟和小蜡螟两种。由于其生长周期短、食料来源丰富，易于大量繁殖等优点，近些年逐渐应用于医学、药学、农学等领域，如线虫学研究、农药开发、饵料加工等。正是基于其较高的经济价值和科研价值，近些年来，对大蜡螟的养殖技术和饲料配方等方面的研究越来越多。赵军（2010年）就以天然中蜂旧巢脾为饲料成功的进行了大蜡螟的饲养并进行了生物学观察研究。黄诚华（2010年）等通过比较8种人工饲料配方对大蜡螟的养殖效果，确定了较为理想的大蜡螟养殖配方。

在自然界中，大蜡螟要完成一个世代需要约60-80天，一年仅能发生3代，其各个虫期的长短与季节变化有关，卵期一般为8～23天，幼虫期27～48天，蛹期9～23天，成虫期为9～44天。蜡螟一般出现在3～4月，白天潜伏不活动，晚上活动，雌蛾与雄蛾在夜间交尾，然后潜入蜂箱里产卵，卵产于蜂箱的缝隙处或箱底的蜡屑处。一只大蜡螟每昼夜产卵100～900粒以上，最多达1800粒。一只雌蛾最多能活10～14天，卵经10天孵化，初孵化出的小幼虫体长不足1毫米，行动灵活、爬行迅速，每秒钟可爬行7～8毫米。

自然界中大蜡螟生长周期范围较广，生长速率不一致；且现有文献报道的饲养技术标准化程度较低，批间和批内大蜡螟个体差异较大；如需集约化养殖，标准化程度需要进一步加强。同时在研究过程中还发现，温湿度、饲料配方、饲料添加量等均会影响大蜡螟的生长速率和个体大小；温度对于老熟幼虫的保藏效期影响较大；如果卵孵化盒的通气孔径过大则会造成刚孵化的幼虫逃逸，还会带来环境危害的风险。

技术实现要素：

本发明为了克服现有技术的不足，满足实验室研究所用，提供了一种大蜡螟实验室标准化养殖方法，克服了目前大蜡螟养殖标准化程度低，生长速率不一致，生长周期范围广，收获的同批次大蜡螟老熟幼虫比率低等问题。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的大蜡螟实验室标准化养殖方法包括下述步骤：

第一步，将购买的大蜡螟老熟幼虫置于14~16℃冷藏箱中保藏，保藏周期≤3个月；

第二步，从冷藏箱中取出的老熟幼虫放在蜡螟集卵盒中置于昆虫培养箱中培养，每个蜡螟集卵盒放置20~30条，培养至15~20天开始出现羽化现象，以第一对雌蛾/雄蛾羽化时开始计时，再培养10天，每天从蜡螟集卵盒中收集的卵片置于4℃密封保藏，卵保质期≤7天；

第三步，称取0.10±0.02g的卵片，放置到含有100g卵孵化培养基的幼虫养殖盒中，在幼虫养殖盒的盒体与盒盖之间设置180目细尼龙网，然后将幼虫养殖盒置于昆虫培养箱中培养7~10天，卵陆续孵化成幼虫，持续18~22天，将幼虫从卵孵化盒中剥离后室温保存待用；

第四步，将第三步剥离出的幼虫按个体大小分类，同一规格的幼虫每150±10条放置到含有300g养殖培养基的幼虫养殖盒（为降低成本，也可采用一次性塑料饭盒，盒盖上用电烙铁均匀打60-80个直径＜2mm的透气孔）中，置于昆虫培养箱中继续培养10~13天即可进行收获，收获的大蜡螟老熟幼虫率≥50%，其中80%以上的大蜡螟≥0.5g/条；

第五步，将第四步收获的老熟幼虫每150条放置在一个蜡螟幼虫存放盒中，盒内放干燥剂6~10包，置于14~16℃冷藏箱中保藏待用，亦可进行下一轮培养。

所用的昆虫培养箱的温度为28~30℃，湿度50~70%，通风效果良好。

第三步中所用的卵孵化培养基配比为：酵母粉:奶粉:甘油:水:蜂蜡:蜂蜜:面粉:麦麸:玉米粉=1:2:2:2:2:2:4:4:4，其中麦麸颗粒的直径为1-2mm。

第四步中所用的养殖培养基的配比为：酵母粉:奶粉:甘油:蜂蜜:面粉:麦麸:玉米粉=1:2:2:4:4:4:4，其中麦麸颗粒的直径为3-5mm。

本发明所用的干燥剂为硅胶，1g/包。

本发明的优点在于实现了大蜡螟实验室标准化养殖，使其生长速率基本一致，保障收获的同批次大蜡螟老熟幼虫比率≥50%，使其更好的应用于线虫学研究、农药开发及饵料加工等领域；具体来说：

1、利用昆虫培养箱严格控制养殖过程中的环境参数，全年不分季节，可随时进行饲养，提高了年养殖批次；

2、优化后的卵孵化培养基和养殖培养基，给卵和幼虫提供了最适宜的营养成分和含水量，保证了各阶段大蜡螟的最佳食料；

3、将卵孵化和幼虫培养分阶段进行，增加了幼虫分选过程，保证每个养殖盒中的大蜡螟生长速率基本一致，提高老熟幼虫合格率；

4、在每个培养盒内固定卵片质量、幼虫养殖条数及培养基质量，一方面可提高培养基的利用率，另一方面可合理化利用养殖盒的空间；

5、卵孵化时，在卵孵化盒盒盖和盒体之间附件一层180目细网，可避免刚孵化的幼虫逃逸，对环境造成污染。

附图说明

图1是本发明养殖方法的工艺流程图。

图2是本发明所用幼虫养殖盒的结构图。

图3是图2中上盖的结构图。

具体实施方式

下面结合工艺流程图，对本发明方法做更加详细的说明。

如图1所示，本发明的大蜡螟实验室标准化养殖方法为：

第一步，大蜡螟种源的获得

大蜡螟种源为通过购买的方式获得的大蜡螟老熟幼虫，老熟幼虫一般保存在人工巢穴中，采购后置于14~16℃冷藏箱中保藏（可降低化蛹速率），保藏周期可达3个月；

第二步，化蛹和羽化培养

从冷藏箱中取出的老熟幼虫放在蜡螟集卵盒（可采用已授权的实用新型专利《蜡螟集卵盒》，专利号ZL 201720844413.7，公开号CN206963722U）中培养（切勿将老熟幼虫从人工巢穴中剥离），每个蜡螟集卵盒可放置老熟幼虫20~30条，置于昆虫培养箱（可采用上海玺袁科学仪器有限公司生产的昆虫培养箱）中培养15~20天左右开始出现羽化现象，以第一对雌蛾/雄蛾羽化时开始计时，再培养10天，每天从蜡螟集卵盒中收集卵片后置于4℃密封保藏，卵保质期≤7天；

第三步，卵孵化培育

称取固定质量的卵片0.10±0.02g，放置到含有100g卵孵化培养基的幼虫养殖盒（其结构如图2、图3所示，图中：盒盖1，盒体2，盒体口沿处设置尼龙网3，盒盖上开设有透气孔4）中，盒体与盒盖之间设置180目尼龙网，可避免孵化后的幼虫从盒盖透气孔中逃逸造成环境污染；然后将幼虫养殖盒置于昆虫培养箱中培养7~10天，卵陆续孵化成幼虫，再持续18~22天后，培养基基本消耗完毕，因幼虫吐丝及排泄，幼虫养殖盒中残留物质呈蜂窝状，此时轻轻抖动，幼虫即从中掉落，幼虫剥离后室温保存待用；本发明所用的卵孵化培养基配比为：酵母粉:奶粉:甘油:水:蜂蜡:蜂蜜:面粉:麦麸:玉米粉=1:2:2:2:2:2:4:4:4，其中麦麸颗粒的直径为1-2mm；

第四步，老熟幼虫培养

因卵个体差异导致的孵化时间不同，培养18-22天时，幼虫大小（长度）从1mm-10mm不等。此时将从幼虫养殖盒中分离出的幼虫，通过肉眼观察，将个体大小相近的幼虫分为一类，如伸展长度＜3mm的一类，介于4mm-6mm的一类，7-10mm的一类等），同一规格的幼虫每150±10条放置到含有300g养殖培养基的幼虫养殖盒中，置于昆虫培养箱中继续培养10~13天即可进行收获，收获的大蜡螟老熟幼虫率≥50%，其中80%以上的大蜡螟≥0.5g/条；本发明所用的养殖培养基的配比为：酵母粉:奶粉:甘油:蜂蜜:面粉:麦麸:玉米粉=1:2:2:4:4:4:4，其中麦麸颗粒的直径为3-5mm；

第五步，老熟幼虫保藏

从养殖培养基中剥离老熟幼虫，每150条老熟幼虫放置在一个蜡螟幼虫存放盒（可采用已授权的实用新型专利《蜡螟幼虫存放盒》，公开号CN207054542U）中，盒内放干燥剂6~10包（干燥剂可选用硅胶，1g/包，避免蜡螟保藏过程中呼吸产生的气体过多，浸湿人工巢穴），再置于14~16℃冷藏箱中保藏待用，亦可进行下一轮培养。

在整个养殖过程中，主要采用昆虫培养箱避光培养，昆虫培养箱的温度为28~30℃，湿度50~70%，要保证通风效果良好。