细胞治疗产品的质量控制

微生物和外来病毒因子检测

1.1 无菌

建议对细胞库、中间体和最终产品进行微生物检测。FDA表示应使用21 Code of Federal Regulations (CFR) 610.12 方法[5]。该方法在美国药典 (USP) <71> [6]中有描述。如果使用替代方法，则应确定其适用性，并且必须等于或大于推荐方法提供的保证。

两种最流行的快速方法是来自 Becton Dickinson[7]的Bactec系统和来自bioMérieux[8]的BacT/ALERT系统。2008年，FDA最初发布了关于快速无菌检测方法验证的指南，但该指南于2015年撤回[9]。我们的工厂已对Becton Dickinson Bactec快速无菌测试方法的使用进行了内部验证，但这尚未提交给 FDA（该机构）。尽管如此，FDA还是允许我们使用这种方法对细胞治疗产品进行无菌测试。

但是，我们确实在无菌测试中对CFR方法进行了修改。我们将需氧和厌氧Bactec培养物培养14天，将真菌培养物培养28天。我们确实有一些IND，FDA允许我们在培养7天后放行产品。各种方法的比较已经发表[10, 11]。FDA现在鼓励使用快速测试系统[4]。

如果在生产过程中使用了抗生素，则应有文件证明在进行无菌测试之前已将其去除。如果它们无法去除，则应按照USP <71> [6]中的描述进行抑菌/抑真菌试验。

还应在制造过程中的关键点进行无菌测试。对于给药前未经处理的冻存产品，应在冻存前进行检测。如果产品被解冻和处理，例如清洗，则应重复无菌测试。这些应包括在给药前立即提供革兰氏染色结果和14天培养，一旦获得结果应立即报告给接受者的医生，并制定处理14天阳性结果的计划。

在其他情况下，如果在获得培养测试结果之前施用产品，建议在最终收获前48-72小时或最后一次进样培养细胞后将样品送去进行无菌测试。这应该与最终配方产品的革兰氏染色和常规14天培养测试相结合[3]。

1.2 支原体

FDA将支原体感染的来源确定为制造和培养环境中使用的任何动物血清，尤其是在使用开放系统的情况下[3]。他们建议在最有可能检测到污染的制造阶段进行测试，例如，在混合培养物之后但在细胞洗涤之前。

应对细胞和上清液进行测试。如果没有足够的时间进行基于培养的测试[12]，他们建议使用基PCR或快速检测分析。有几种经批准的PCR检测方法。这些包括来自Thermo Fisher的 MycoSEQ™ [13]和来自Roche [14]的MycoTOOL™。

如果使用未经批准的方法，则应进行验证以表明该方法在灵敏度和特异性方面与培养技术相当。PCR检测的替代方案是来自Lonza[15]的MycoAlert™检测系统。这是一种生化测试，它利用了在所有六种主要支原体细胞培养污染物中发现的支原体酶的活性。

测试样品中的活支原体被裂解，酶与测试底物反应，催化ADP转化为ATP。然后通过荧光素酶将其转换为光信号，使用光度计进行检测。通过在添加底物之前和之后测量样品中的ATP水平，可以获得指示支原体存在或不存在的比率。由于该测试尚未获得完整的监管批准，建议对培养方法进行验证。

最近，生物梅里埃宣布推出他们的 BIOFIRE®MYCOPLASMA 检测[16]。如果最终产品的成分可能干扰支原体检测，还应进行支原体检测[17]。

2019年，FDA发布了一项拟议规则，以取消目前21 CFR 610.30要求的病毒收集细胞和由体外活细胞培养物生产的活和灭活病毒疫苗的控制液池中真菌血浆检测的测试方法[18]。这表明该机构在考虑其他测试方法时可能具有灵活性。

1.3 外来因子检测

FDA建议咨询他们的“用于生产生物制品的细胞系特征的考虑要点”[19]和国际协调会议(ICH)指南Q5A“源自人类细胞系的生物技术产品的病毒安全评估指南”和动物来源”，以确定其他外来因子可能需要进行哪些测试[20]。

一般而言，对于来自经过供体资格测试的供体的自体或同种异体细胞系的细胞治疗产品，通常不需要进行病毒检测[21]，除非这些产品用于衍生连续细胞系，例如，间充质基质细胞。如果生产细胞系，如果该细胞系用于非常小的临床试验，有时可能仅进行体外外源病毒测试。然而，更常见的是，除了体外和体内外源病毒检测外，还必须通过PCR检测该品系的一组特定病毒[3]。

鉴别

执行身份测试以验证产品是否正确，并将其与工厂制造的其他产品区分开来。这可以使用各种测试来完成。最常用的是流式细胞术的免疫表型分析。在大多数情况下，最终产品的免疫表型应符合特定CD标记物表达或不表达的规范。

在早期临床试验中，表达水平可能相对宽松，例如<2% CD19、>70% CD3，但随着试验的进展，预计表达水平会更严格。在分析中加入许多阳性和阴性标记是正常的，这些应该由监管机构审查。免疫表型也用于确定最终产品中的相对细胞纯度。这些检测应由经认可的流式细胞术实验室进行。

另一种可用于确定产品身份的分析是基因多态性分型，例如血型，这可能包括在内[3]，尽管这不是高度特异性的。相反，对于表达HLA 抗原的细胞来说，细胞供体和最终产物之间的HLA身份是更可取的。

纯度

纯度被定义为在最终产品中相对不含外来材料，无论该材料是否对预期接受者有害或对产品有害[22]。杂质包括内毒素、残留蛋白质或用于脉冲或刺激细胞的肽、制造过程中使用的试剂/成分，例如，细胞因子、抗体和血清，以及意外的细胞表型。

3.1 残留污染物

应检测最终产品的生产过程中使用的残留蛋白质和肽以及培养和纯化过程中使用的试剂，例如细胞因子、生长因子、抗体、珠子和血清。还应测试最终产品的细胞碎片和其他免疫表型。IND[3]中必须描述要使用的检测方法和产品放行的规范。

3.2 内毒素

测试热原性的传统方法是兔热原测试[23]。然而，这在很大程度上已被鲎变形细胞裂解物测试所取代。这反过来已使FDA批准的设备自动进入快速检测-Endosafe® nexgen-PTS™系统与FDA许可的 Endosafe® LAL墨盒[24]。通常批准的规格为<5.0 EU/kg 体重/小时。对于所管理的产品。对于鞘内给药的产品，限值为0.2 EU/kg体重/小时[3]。Endosafe系统的使用提供了适用于所有产品的快速周转时间。

效力

应在临床试验的所有阶段对产品进行效价测定；然而，在第 3 阶段开始时，测定应包括测量适当生物活性的体内或体外测试。该检测必须在产品许可之前进行验证。如果无法开发定量生物测定，则可以使用定量物理测定，前提是它与定性生物测定结合并与之相关 [3]。

对于早期试验，其中产品的体内作用机制可能不清楚，使用定量可能效应机制的试验是正常的，例如细胞因子释放、细胞毒性试验等。这些应该讨论在提交方案时与监管机构联系。

其他检测

5.1 细胞活力

应该有一个特定的细胞活力释放标准。FDA 通常要求基准为 70% [3]。如果这无法实现，则应证明死细胞不会对产品的安全给药或其治疗效果产生不利影响。许多测定可用于确定细胞活力。常用的是染料排除试验，例如台盼蓝排除法[25]；然而，这取决于观察者的可变性，并不总能检测到随后可能发生的亚致死损伤。使用流式细胞术进行的分析，例如，用7氨基放线菌素 D (7-AAD) 染色，可提供更具重现性的生存力评估 [26]。也可以通过膜联蛋白染色来测量细胞凋亡[27]。现在可用于执行自动细胞计数和活力测量的设备，例如来自Nexcelom [28]的Cellometer Auto 1000 Bright Field Cell Counter 和来自Chemometec [29] 的 NucleoCounter® NC-202™。这些应在使用前进行验证。

FDA通常根据冷冻保存时的活力来确定活力释放标准。应该确认，通过验证用于冷冻的方法，解冻后可以满足该标准。

5.2 细胞剂量

应指定要施用的最小活细胞和功能细胞数。建议将根据临床前实验确定的最大剂量告知 FDA。

产品稳定性

必须在临床试验的早期阶段评估产品的稳定性，以确定它在整个试验期间都是稳定的。ICH已发布指南以帮助这些研究：“ICH指南Q1E'生物技术/生物制品的稳定性测试’[30]和指南Q1A(R2)'新药和产品的稳定性测试’”[31]。

FDA要求在IND的所有阶段进行稳定性测试。测试方案应包括无菌、特性、纯度、质量和效力的测量[3]。必须描述测试方法以及采样时间点（包括时间零点）、测试温度和任何其他适当的信息。应在零时间、稳定性研究结束时和一个中间时间点进行无菌测试[3]。

讨论

质量控制部门通过进行中间和最终产品测试，在治疗产品的发布中发挥着重要作用。他们提供的信息还可以帮助识别制造程序的改进并识别操作过程中的弱点。因此，它们在GMP操作中起着至关重要的作用。

本章代表了一个时间点，始终鼓励研究人员联系适当的监管机构，以确定用于临床使用的细胞疗法和病毒载体的释放的现行法规。

from the new Book <cell therapy>，需要电子书的童鞋可以微信联系我

本站仅提供存储服务，所有内容均由用户发布，如发现有害或侵权内容，请点击举报。