Pull-down蛋白质鉴定技术

Pull-down 实验又叫做蛋白质体外结合实验（binding assay in vitro），是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-)，从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白。带标签的诱饵蛋白能被特异结合该标签的固相亲和配基捕获，形成次级亲和支持物”，用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。纯化产物洗脱后，经Western blot或LC-MS/MS验证，即可诱饵蛋白互作的蛋白进行鉴定。

Pull-down蛋白质鉴定技术步骤（图片来源：百泰派克生物）

Pull-down实验的具体步骤：

1. 表达纯化GST、polyHis或Biotin标记的诱饵蛋白；

2. 使用固定化亲和配体将诱饵蛋白与固相基质稳定结合；

3. 再将诱饵蛋白与待测细胞裂解液进行混合孵育，在这一过程中，诱饵蛋白与目标蛋白相互作用并结合在一起，通过清洗除去非特异性结合的杂蛋白，即可获得与诱饵蛋白相互作用的目标蛋白；

4. 最后通过质谱分析对目标蛋白进行鉴定。

通过GST融合蛋白pull-down技术，可鉴定与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质，或两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。高准确性，高灵敏度。适合中度复杂的蛋白质样品，如相互作用的蛋白质条带和洗脱液等。百泰派克公司利用进口的GST pull-down 试剂盒，能够快速准确的完成蛋白互作实验，结合公司先进的UPLC-MS质谱平台，推出基于pull-down的蛋白分析一站式技术服务，灵敏度高、分辨率准确。

Pull-down蛋白质鉴定技术研究蛋白互作的方法不仅强大，而且高效快速，操作简便，可直接检测是否具有相互作用。