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神经酰胺检测方法

神经酰胺(Ceramide, Cer)是由一个脂肪酸与一个鞘氨醇碱基连接而成的一类重要的生物活性物质,同时在神经系统的鞘脂代谢中起第二信使分子作用,参与激活多种应激相关酶,介导细胞凋亡。

神经酰胺合成途径(图片来源:迪信泰检测平台

神经酰胺检测方法

1. 苯甲酰化-紫外检测法

原理:利用苯甲酰化试剂与神经酰胺在一定温度下进行柱前衍生化反应,产生一种N-酰基化合物,由于此物质在230~280nm处具有很强的紫外吸收,从而间接检测神经酰胺含量。

优点:灵敏度高,最小检测量可达nmol级;

缺点:样品需衍生化,步骤繁琐,耗时;衍生化产物稳定性低,易受其他物质的影响。

2. 荧光标记-荧光检测

原理:利用一定的衍生化方法处理样品,产生对荧光敏感的物质,从而间接检测神经酰胺含量。

优点:具有很好的定量结果;

缺点:样品需衍生化,步骤繁琐,耗时;产生的副产物无法完全除去。

3. 高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测法

原理:通过加热将流动相蒸发,最后检测样品颗粒的光散射。由于ELSD是一种通用型质量检测器,其响应值与待测物的质量有关,因此可以进行定量检测。

优点:无需衍生化,操作简便,分析时间较短;误差小,结果准确;

缺点:ELSD的响应值与待测物的质量关系曲线较复杂;需选择合适的标准物质以确保结果的准确性。

4. 液质联用法

原理:LC-MS以高效液相色谱作为分离系统,质谱为检测系统。样品经液相色谱分离后,进入质谱部分。经离子源离子化后,再经质量分析器将离子碎片按质量数分开,经检测器得到质谱图。

优点:灵敏度高,检测速度快,准确性好,选择性强;LC-MS是目前神经递质检测应用最广泛的方法。

缺点:费用较高。

迪信泰检测平台采用HPLC-ELSD和LC-MS法,可高效、精准的检测近30种神经酰胺,如Cer(d18:0/16:0)、Cer(d18:2/22:0)、Cer(d16:1/17:0)等。

资料来源:谢建平等. 神经酰胺及其分析与分离技术研究进展, 2002.  

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