图4 Illustration of experimental strategy in steady-state approach 用ActiCHO P进行灌流培养,研究细胞在不同的CSPR时培养液中的营养成分变化,在每个CSPR时维持3天后进行取样检测。 Spent media analysis and new medium designStep 2
取样进行上清分析,可看到氨基酸等营养成分的比例变化,通过添加一定比例的补料来优化灌流培养基。 案例中根据ActiCHO Feed A和ActiCHO Feed B的营养成分,最终确定在ActiCHO P中添加7%的ActiCHO Feed A和1%的ActiCHO Feed B作为灌流培养基。 Medium verification in perfusionStep 3
图5 Perfusion run at 1 RV/d to determine the maximum performance 用灌流培养基进行培养确认,灌流速率设定为1 RV/d(Reactor Volume/day),根据培养的结果,选取蓝色部分作为最佳的操作窗口(cv>50 MVC/mL,CSPR≈20 pL/c/d,qP≈30 pcd)进行稳态培养确认。 Confirmation under steady-stateStep 4
图6 Steady-state conditions at CSPR=20 pL/c/d 灌流速率维持在1 RV/d的情况下,通过定期排出细胞,使密度维持在50MVC/ml左右,罐内条件达到相对的稳态,在允许的范围内延长培养时间,最大限度利用培养基和硬件设备,使利益最大化。 总结 随着生物制药行业的发展,灌流培养越来越被大家接受,而随着设备和培养基的不断升级,灌流培养在很多方面体现出其优越性,将在生物制药行业发挥重要的作用。