余克娇，陈晓辉，毕开顺(沈阳药科大学，辽宁沈阳110016)
摘要：目的采用高效毛细管气相色谱法同时测定乌拉草挥发油中主要成分月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸的含量，并研究其体外抗菌作用。方法色谱条件：SE-30毛细管柱(30mx0.32mmX0.6pm);程序升温；进样温度280C；检测器温度280C;载气：N?;流量：40mL-min'；FID检测器；内标物正十六烷。采用试管稀释法测定挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)O结果月桂酸在0.226~2.26g-L"'，肉豆蔻酸在0、332〜3.32g-L_l,棕桐酸在1.79-17.90g-L1范围内呈良好的线性关系；平均回收率为(〃=9)98.3%,98.5%和98.0%(RSO为1.4%,2.7%和2.2%)。挥发油对实验菌的M1C分别为0.6,1.2和1.2g・L「'。结论该法简便、准确，可作为控制乌拉草挥发油质量的方法。同时挥发油对上述菌株有较强的抑制作用。
关键词：乌拉草；高效毛细管气相色谱；最小抑菌浓度中图分类号:R927.2文献标识码：A文章编号：1004-2407(2005)05-0204-03
乌拉草(CarexmeyerianaKunth)是莎草科(Cyperaceae)要草属(Carex)多年生草本植物，灰绿色，主要产于黑龙江、吉林、内蒙古、四川等地⑴，与人参、貂皮并称为“东北三宝”塔头乌拉草。用乌拉草为主要原料制成的鞋垫、床垫，具有祛寒除湿、活络止痛、抗菌等作用⑵，适于足部疾患如脚癣、脚气等的预防和治疗⑶。长期使用对风湿、关节痛有辅助治疗的作用。乌拉草化学成分主要是挥发油和黄酮类成分,挥发油具有较强的生理活性，其中脂肪酸为其主要成分之一，具有抗菌和抗真菌作用⑷。目前，有关乌拉草，塔头乌拉草，挥发油化学成分的研究很少报道，本文首次对其挥发油中主要成分脂肪酸类化合物进行分析，建立了气相色谱法同时测定月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸的含量，为乌拉草，塔头乌拉草，挥发油的质量控制提供了准确可靠的测定方法。同时首次考察了该挥发油的抗菌活性。
1仪器、试剂与材料
1.1仪器与试剂GC-9A型气相色谱仪(日本岛津公司);N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；正十六烷(色谱纯，上海试剂一厂)；氯仿(分析纯，天津市博迪化工有限公司)。
1.2材料乌拉草釆自东北三省，经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为CarexmeyerianaKunth的全草；月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸对照品(上海试剂一厂)；试验菌株金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌由北京微生物所菌种中心提供。
2方法与结果
2.1乌拉草，塔头乌拉草，挥发油的提取取经粉碎、过2号筛的乌拉草药材约80g,精密称定，置1000mL圆底烧瓶中，加10倍量蒸馋水，浸泡1h,按2000年版《中国药典》(一部)附录XD挥发油测定法进行，连续蒸慵9h。放冷,将提取液以氯仿萃取3次，每次15mL,合并氯仿液，减压除去溶剂,加入适量无水硫酸钠脱水，得26.4mg乌拉草挥发油，呈淡黄色油状物，具有芳香气味。
2.2色谱条件SE-30石英毛细管柱(30mXO.32mmX0.6ftm),程序升温，初始温度1801,保持5min,以6C·min-1升至230C，保持7min;进样器温度280X：，检测器温度280t，载气：N,，流量：40,FID检测器，内标物正十六烷，进样2/L。
2.3系统适用性试验在上述色谱条件下进样分析，以月桂酸色谱峰计算理论板数,其不低于25000,与相邻色谱峰的分离度均大于1.5,拖尾因子在0.95~1.05之间。
2.4含量测定
2.4.1内标溶液的制备取正十六烷适量加氯仿配成每1mL含6mg的溶液作为内标溶液。
2.4.2对照品溶液的制备分别精密称取月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸对照品适量，置5mL量瓶中，精密加入内标溶液0、5mL,用氯仿稀释至刻度，摇匀，配成每1mL含月桂酸0,7mg,肉豆蔻酸1mg,棕桐酸5mg的混合溶液，作为对照品溶液。
2.4.3供试品溶液的制备取2、1项下提取的乌拉草，塔头乌拉草，挥发油，以氯仿溶解并定容至1mL量瓶中，精密加入内标溶液0」mL,摇匀，作为供试品溶液。
2.4.4测定法在上述色谱条件下，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2jzL,注入气相色谱仪，记录色谱图，按内标法计算，即得。气相色谱图见图1。
2.5标准曲线的制备精密称取月桂酸28.2mg、肉豆蔻酸4L5mg和棕梱酸223.5mg置同一5mL量瓶中，氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液0.2,0.4,0.6,1.0和2.0mL分别置5mL量瓶中，精密加入内标溶液0.5mL,氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件进行分析,得线性回归方程为：月桂酸Y=0.905OX-0.0101(r=0.9999);肉豆蔻酸y-0.6142X-0.0086(r=0.9993);棕桐酸Y=0.3625X-0.0126(r=0.9995)。表明月桂酸在0.226-2.26g-L_l,肉豆蔻酸在0.332-3.32g-L_l,棕桐酸在1.79-17.90g-L'范围内呈良好的线性关系(7Z=5)。
2.6校正因子的测定照2.5项下操作，重复测定3次，计算校正因子，月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸的平均校正因子为1.816,2.652和4.468。
2.7仪器精密度取同一供试品溶液，在上述色谱条件下测定含量，重复进样6次,计算得月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸RSD为4.0%,2.7%和2.1%。
2.8重复性试验取同一批乌拉草，塔头乌拉草，药材6份，分别精密称定,按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定含量，计算得月桂酸、肉豆蔻酸和棕欄酸RSD为
1.5%,2.7%和2.9%。
2.9稳定性试验将供试品溶液在室温下贮存，分别于0,2,4,6,8和24h在上述色谱条件下测定含量，计算得月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸RSD为1.8%,3.2%和1.7%,表明供试品溶液在24h内稳定。
2.10加样回收率试验精密称取乌拉草药材粉末共9份，分别精密加入高、中、低浓度的对照品各3份，按2.4项下方法和上述色谱条件测定，得月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸的平均回收率为98.3%,98.5%和98.0%,RSD为1.4%,2.7%和2.2%。
2.11样品含量测定取不同产地乌拉草药材，按2.4项下方法操作，在上述色谱条件下测定，计算含量，结果见表1。
3体外抗菌试验
以常见的食品污染菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和深部感染真菌白色念珠菌为菌株，以观察挥发油对消化道致病菌和脚癣致病菌的抑菌作用。
3.1制备种菌液取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌2个菌株，分别在肉汤琼脂斜面37C下培养约24h后，经振荡、搅匀，作为种菌液。另取白色念珠菌1个菌株，用0.5mL沙保液体培养基溶解冻干菌体，使成悬浮状，吸取菌体悬浮液，移植于沙保琼脂培养基斜面上，置37C保温箱中活化48h,用无菌水洗脱菌落，制成菌悬液备用。
3.2中药原液的制备取水蒸汽蒸馋提取的乌拉草，挥发油，用1%梭甲基纤维素钠溶液溶解，得中药原液。
3.3方法采用试管稀释法⑸。
(1)稀释药液：取中药原液分别以普通肉汤倍比稀释成1：2,1：4,1：8,1：16,1：32和1：64各6个浓度，即含中药浓度分别为10,5,2.5,1.2,0.6和0.3g-L'o每个浓度设3个平行管，并分别设不含中药的肉汤培养基为对照管。白色念珠菌的操作用沙保液体培养基稀释。流通蒸汽灭菌30min,冷却备用。
(2)加入菌液：每支试管内分别加入备用的实验菌50mL,置37C保温箱培养24h。白色念珠菌置28C保温箱培养1周。
(3)结果判断：除白色念珠菌可直接观察外，分别从其余试管中各取一接种环液体点种于营养琼脂平板,24h后确定是否有细菌生长。以药物抑制待测菌生长的最低浓度为最小抑菌浓度(Minimalinhibi toryconcentration,MIC)o
3.4结果挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌均有较强抑菌作用，分别被稀释至1：32,1：16和1：16仍完全抑菌(即MIC=0.6,1.2和1.2g-L-')(见表2)。
4讨论
本文建立了乌拉草，挥发油中月桂酸、肉豆蔻酸和棕桐酸的毛细管气相色谱法，操作简单、准确，可作为控制其质量的方法。此外，该挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌有较强的抑制作用，为乌拉草挥发油进一步开发利用提供了实验基础。
世界科学资料显示，乌拉草是目前世界范围内植物界中，仅存的两种能终身抵御真菌侵蚀与寄生能力的植物之一，这是一般动、植物制品所不具备的天然属性。具有保暖除燥、驱寒除湿、活络止痛、助力睡眠、抑抗真菌等功效。对活络止痛、去寒除湿、养肤健肤、调节 睡眠、抵抗真菌具有辅助治疗作用适于脚癣的预防和治疗。
乌拉草是多年野生的草本植物，其叶细长柔软、纤维坚韧、不易折断、能够透气防潮并且御寒，不仅具有保暖防寒的作用，还有很多保健养生的功能，可以作为养生垫、养生枕、坐垫、抱枕、挂件、草鞋、草褥、人造棉、纤维板、草编工艺品、造纸等方面的良好材料，还可以用来保暖，填充在褥垫、床垫及鞋内，因此中国东北山区的老百姓十分喜爱它。
长期使用对风湿、关节痛具有辅助治疗作用，是百草里的软黄金。
乌拉草中含有多种成分，其中黄酮类成分木犀草素是乌拉草的有效成分，可作为控制该药材质量的指标成分。
木犀草素是一种天然黄酮类化合物。具有消炎，抗过敏、降尿酸、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等多种药理活性。
临床主要用于止咳、祛痰、消炎、降尿酸、治疗心血管疾病、治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症，SARS，肝炎等。
乌拉草功能：
1：除味祛味
2：通经活络
3：消除疲劳
4：驱寒降燥
5：养肌健肤
6：保暖除湿
7：抑菌防螨
8：提高免疫力
9：改善血液微循环
乌拉草的有效成分可以增强人体免疫力，有利于血液循环，对三高人群有保健功能，且预防各种疾病。
根据乌拉草的功效理论可以推断，乌拉草对于人体的心肝脾肺肾都有良好的辅助保健功效。
心：乌拉草可以促进血液循环，消除疲劳，含有的游离酸和丰富蛋白等微量元素可以促进心脉的运营起到护心保心的功效。
肝：乌拉草可促进睡眠，睡眠好就可以增强食欲，从而起到保肝护肝的效果。
脾：乌拉草可以促进新陈代谢，起到增强食欲的效果，从而间接辅助脾胃保健。
肺：乌拉草气味芬芳，绿色永驻，可以净化空气，清洁空气质量，从而起到间接清肺的效果。
肾：乌拉草可以消除腰肌劳损，通筋活络，从而起到间接的护肾效果。
以上功效均为理论推断，同时也是东北老一代人们的口述传承，并无药典依据，具体功效还得经过实际体验来自行感受。
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