高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。它应用如此广泛,那么问题来了,我们在选择液相色谱法时该如何建立方法?
如何建立一个HPLC的方法?
能够开发一个新方法对于HPLC的初学者来说有很大吸引力,但是新手往往会感觉无法下手,其实完全不是那么一回事,只要你有一台双泵或者四元泵的HPLC,看了本文,就可以上手去做了。
首先我们要保证的一个根本原则是:我们要做出来的是一个有稳定,明显的分离,并且在检测器的响应明显,有定量理论基础的方法。
这句话中的“稳定”、“明显”是必要条件,有一点不达标方法就没意义。
然后,对于新手来说,最好遵守这样一个小原则:我们从不新建,我们只是套用。
一.在食品分析中的应用
1.食品营养成分分析:蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸(邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等)、有机胺、矿物质等;
2.食品添加剂分析:甜味剂、防腐剂、着色剂(合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等)、抗氧化剂等;
食品污染物分析:霉菌毒素(黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等)、微量元素、多环芳烃等。
二.在环境分析中的应用
环芳烃(特别是稠环芳烃)、农药(如氨基甲酸脂类,反相色谱)残留等。
三.在生命科学中的应用
HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面:
1.低分子量物质,如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。
2.高分子量物质,如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶(各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等)的纯化、分离和测定。
过去对这些生物大分子的分离主要依赖于等速电泳、经典离子交换色谱等技术,但都有一定的局限性,远远不能满足生物化学研究的需要。因为在生化领域中经常要求从复杂的混合物基质,如培养基、发酵液、体液、组织中对感性趣的物质进行有效而又特异的分离,通常要求检测限达ng级或pg级,或pmol,fmol,并要求重复性好、快速、自动检测;制备分离、回收率高且不失活。在这些方面,HPLC具有明显的优势。
四.在医学检验中的应用
体液中代谢物测定;药代动力学研究;临床药物监测:
1.合成药物:抗生素、抗忧郁药物(冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等)、黄胺类药等。
2.天然药物生物碱(吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙)等。
五.在无机分析中的应用
阳、阴离子的分析等。
(文章来源:互联网 由实验与分析编辑整理)
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