高效液相色谱方法的建立

高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。它应用如此广泛，那么问题来了，我们在选择液相色谱法时该如何建立方法?

如何建立一个HPLC的方法?

能够开发一个新方法对于HPLC的初学者来说有很大吸引力，但是新手往往会感觉无法下手，其实完全不是那么一回事，只要你有一台双泵或者四元泵的HPLC，看了本文，就可以上手去做了。

首先我们要保证的一个根本原则是：我们要做出来的是一个有稳定，明显的分离，并且在检测器的响应明显，有定量理论基础的方法。

这句话中的“稳定”、“明显”是必要条件，有一点不达标方法就没意义。

然后，对于新手来说，最好遵守这样一个小原则：我们从不新建，我们只是套用。

一.在食品分析中的应用

1.食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸(邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等)、有机胺、矿物质等;

2.食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂(合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等)、抗氧化剂等;

食品污染物分析：霉菌毒素(黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等)、微量元素、多环芳烃等。

二.在环境分析中的应用

环芳烃(特别是稠环芳烃)、农药(如氨基甲酸脂类，反相色谱)残留等。

三.在生命科学中的应用

HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面：

1.低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。

2.高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶(各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等)的纯化、分离和测定。

过去对这些生物大分子的分离主要依赖于等速电泳、经典离子交换色谱等技术，但都有一定的局限性，远远不能满足生物化学研究的需要。因为在生化领域中经常要求从复杂的混合物基质，如培养基、发酵液、体液、组织中对感性趣的物质进行有效而又特异的分离，通常要求检测限达ng级或pg级，或pmol，fmol，并要求重复性好、快速、自动检测;制备分离、回收率高且不失活。在这些方面，HPLC具有明显的优势。

四.在医学检验中的应用

体液中代谢物测定;药代动力学研究;临床药物监测：

1.合成药物：抗生素、抗忧郁药物(冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等)、黄胺类药等。

2.天然药物生物碱(吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙)等。

五.在无机分析中的应用

阳、阴离子的分析等。

（文章来源：互联网 由实验与分析编辑整理）