无论是母种、原种或栽培种,如果未及时使用,其菌丝就会很快衰老,降低生产力,影响产量和质量。因此,菌种必须进行适当的保存。其目的是保持菌种的生活力,降低死亡速度,保持菌种原有的优良性状,防止退化,确保菌种纯一,防止杂菌感染。
菌种保存的基本原理,主要是通过采用低温、干燥与缺氧的条件,以中止菌种的繁殖,降低其新陈代谢,使之处于休眠状态。菌种保存的方法很多,常用的为斜面低温保存法,液体石蜡保存法等。有条件的还可采用冷冻真空干燥保存法。
1.斜面低温保存法
这是最简便最普通的保存方法。即将菌丝生长良好的斜面菌种,置于冰箱内;在4℃左右低温下保存;以后每隔2~3个月转管移接一次。这种保存方法适于大多数食用菌菌种。但草菇菌种在5℃以下很快死亡;所以草菇的菌种,不断放在冰箱中,置于室温保存即可,每隔2~3个月,也须重新移接一次,防止菌种老化。为防止菌种在保存过程中积累过多的酸,在配制保存母种培养基时添加0.2%磷酸二氢钾或0.02%碳酸钙等盐类,对培养其PH 值的变化能起缓冲作用。
为了延长保存时间,试管口处要用塑料薄膜包扎,以防培养基干固。在农村没有冰箱设备的,可把母种试管,用石蜡封口,再用塑料薄膜包封,沉放于清凉的井底保存。
2.液体石蜡保存法
食用菌的菌丝体都可用此法保存,方法简单,只在斜面菌种试管内,注入一层已灭过菌的液体石蜡,注入量以高出斜面1厘米为宜,使菌种与空气隔绝,降低其新陈代谢的活动,然后在棉塞外包以塑料薄膜,直立存放于室内干燥处或低温下保存,一般可保存一年以上。液体石蜡使用前,要在且公斤/厘米2的压力下维持1小时,连续灭菌两次。彻底灭菌后方可使用。灭菌后的液体石蜡,由于有水蒸气渗入,会影响菌种保存质量,因此,需要放在44℃烘箱中,烘烤数小时,使水蒸气蒸发。在室温下也可以,不过所需的时间要长些。
使用液体石蜡菌种时,只要用接种计从斜面上挑取少许菌体,放在新鲜的培养基上;经过培养,即可应用。原种则重新蜡封,继续保存。
3.木屑试管菌种保存法
用杂木屑按原种的培养基配制装入大号试管,容量为管高的三分之二,擦净管口塞紧棉塞,用牛皮纸包扎管口后高压灭菌,然后移入母种,在25~28℃下培养,待长满菌丝后,立即移到低温干燥环境保存、或埋于尿素、硝酸铵或地洞中保存,效果更好,并能延长保存时间。
4.冷冻干燥保藏法
这种方法采用真空、干燥、低温等手段,使菌种新陈代谢活动处于相对静止状态,在低温下快速冷冻,又在低温下真空干燥,而使菌细胞的结构与成分保持原来状态而保存菌种。还有沙土保存法、液氮超低温保藏法、滤纸片保存法、菌丝球生理盐水保藏法、麦粒保藏法、干孢子真空保藏法等。要根据自己的工作需要及具体条件而定。一边保存,一边还要分离,复壮,做好选育工作,延续菌种的忧良性能。
原种和栽培种培养好后,应立即用于扩接栽培种或栽培生产,不宜保存过久,时间越长,生活力越差,也越容易感染杂菌。若因特殊情况不能及时使用,原种瓶口用牛皮纸包好,置4~14℃条件下可保藏一年左右。栽培种短期保存也可放于阴凉、干燥通风的室内,但种瓶不宜堆叠过高,以免堆内发热,加速菌丝老化。
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