试验目的是研究草鱼摄入枯草芽孢后，对草鱼的生长、免疫指标的影响，以及通过粪便排出的枯草芽孢对水质的影响。
1 试验材料
试验鱼为草鱼，在暂养池（2×1.2×1m3）中投喂商品饲料驯化10d 后，挑选体表无损伤、大小基本一致的健康草鱼进行试验。测定鱼初始体重。
2 试验设计
试验采用单因素梯度试验法，分为3 个组，分别为添加了1 亿/g 和1 千万/ g 的试验饲料为试验组，最后饲料中芽孢的含量为2800 万/ g 和440 万/ g，以没有添加芽孢的饲料为对照组。每个处理组设3 个重复，每个重复25 尾鱼。试验期为21d。
3 饲养管理
水源为活性炭脱氯后曝气自来水，每天投饲2 次，时间为8∶30 ～ 9∶30和15∶00 ～ 16∶00，前10d 每个养殖桶投喂量为20g( 第一天所有养殖桶摄食最少量)，并保持日光照射时间为每天10h(8∶00 ～ 20∶00)。温度控制在22 ～ 25℃左右。在饲养的期间，不使用任何鱼药和水体消毒剂。
4 取样
分别于投喂后的1d、4d、7d、10d，取水族箱的底层水，在4 个不同的地方取水，混合后测量水质。分别于投喂后的3d、6d、9d，取底层水测量枯草芽孢。在试验的第21d 时，在每个养殖桶中随机选取两条草鱼抽取血液，3000rpm 离心10min，取血清冷藏备用。
5 样品检测及分析
水样的C O D、氨氮和亚硝酸盐分别采用酸性高锰酸钾法、纳氏试剂法和重氮偶氮光度法。水体中芽孢的含量在80℃加热10mi n 后，采用涂布法测量。血清中的碱性磷酸酶、总蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶直接送医院检测，血清中的酸性磷酸酶采用南京建成生物工程研究所生产的酸性磷酸酶试剂盒检测。
6 试验结果
由表1 可以看出，6d 开始，1 亿/ g 枯草芽孢组和1 千万/ g 枯草芽孢组水体的芽孢基本稳定。可见持续的投喂可以控制水体芽孢的含量。每天20g 的投喂量可以使1 亿/ g 枯草芽孢组的水体芽孢含量达到2×106 cfu/L 以上；使1 千万/ g 枯草芽孢组的芽孢含量达到4×105cfu/L 以上。
表1 水体中枯草芽孢杆菌的含量（cfu/L）
由表2 可以看出，与对照组相比，在第4d 时，1 亿/g 枯草芽孢组和1 千万/g 枯草芽孢组的亚硝酸盐含量分别降低了18.99% 和16.43%，在第7d时，1 亿/g 枯草芽孢组和1 千万/g枯草芽孢组的亚硝酸盐的含量降低了25.37% 和25.21%， 在第10d 时，1 亿/g 枯草芽孢组和1 千万/g 枯草芽孢组的亚硝酸盐的含量降低了18.84% 和43.44%。在10d 内，1 亿/g 枯草芽孢组、1 千万/g 枯草芽孢组和对照组的亚硝酸盐都在升高。但是1 亿/g 枯草芽孢组和1 千万/g 枯草芽孢组升高的速度要低于对照组，可见饲料中添加枯草芽孢杆菌可以减少水体中亚硝酸盐的含量。
表2 水体中亚硝酸盐的含量(mg/L)
由表3 可以看出，第1d 时，水体的氨氮含量为1 千万/ g 枯草芽孢组>1 亿/ g 枯草芽孢组> 对照组，在第4d 时，对照组>1 千万/ g 枯草芽孢组>1 亿/ g 枯草芽孢组，在第7d 时，对照组>1 千万/ g 枯草芽孢组>1 亿/g 枯草芽孢组；在第10d 时，对照组>1 亿/ g 枯草芽孢组>1 千万/g枯草芽孢组。但是各组的差别很小，可见1 亿/g 枯草芽孢组和1 千万/ g枯草芽孢组对水体之中氨氮的含量没有影响。
表3 水体中氨氮的含量(mg/L)
由表4 可以看出，在第1d 时，水体中COD 的含量为对照组>1 亿/g 枯草芽孢组>1 千万/g 枯草芽孢组，在第4d 时，1 千万/g 枯草芽孢组>1亿/g 枯草芽孢组> 对照组，在第7d 时，对照组>1 千万/g 枯草芽孢组>1 亿/g 枯草芽孢组，在第10d 时，1 千万/g 枯草芽孢组> 对照组>1 亿/g 枯草芽孢组，但是各组之间差异很小，可见，1 亿/g 枯草芽孢组和1 千万/g 枯草芽孢组对水体之中COD 的含量没有影响。
表4 水体中COD 的含量(mg/L)
由表5 可以看出，经过21d 的饲喂试验，与对照组相比，草鱼血液中1 亿/ g 枯草芽孢组和1 千万/ g 枯草芽孢组的酸性磷酸酶活性分别提高了12.47% 和4.87%， 碱性磷酸酶的活性分别提高了2.81% 和14.06%， 总蛋白分别提高了13.48% 和12.63% ；谷草转氨酶的活性分别为1 亿/g 枯草芽孢组提高了20.93%，1 千万/ g枯草芽孢组降低了3.49%，谷丙转氨酶的活性与对照组相比，1 亿/ g 枯草芽孢组和1 千万/ g 枯草芽孢组分别提高了81.44% 和38.89%。可见，添加枯草芽孢能促进酸性磷酸酶、碱性磷酸酶的活性，提高总蛋白的含量，但是，却对草鱼肝脏有一定的损伤。
表5 草鱼血清中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶的活性及总蛋白的含量
由表6 可以看出，与对照组相比，1 亿/g 枯草芽孢组和1 千万/g 枯草芽孢组的增重率分别提高了12.97% 和29.08%，饵料系数分别降低了0.90%和22.17%，死亡率与对照组相比，1 亿/g 枯草芽孢组升高了28.61%，1千万/g 枯草芽孢组降低了71.38%。
可见，饲料中添加枯草芽孢可以提高增重率，降低饵料系数，低浓度的添加会提高草鱼的存活率，高浓度的添加会降低草鱼的存活率。
表6 草鱼的增重率、饵料系数以及死亡率
7 小结
7.1 饲料中添加枯草芽孢可以降低水体的亚硝酸盐的含量，但是对氨氮、COD 的含量没有影响，水体中枯草芽孢的含量在第6d 后达到稳定，每天20g 的投喂量可以使1亿/g枯草芽孢组的水体芽孢含量达到2×106cfu/L 以上；使1千万/g枯草芽孢组的芽孢含量达到4×105cfu/L 以上。
7.2 经过21d 的投喂试验，草鱼的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶的活性和总蛋白的含量都有不同程度的提高，表明饲料中添加枯草芽孢对草鱼的免疫力有一定的提高；草鱼的谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性相对对照组也有一定的提高，表明饲料中添加枯草芽孢对草鱼的肝脏有一定损伤。
7.3 饲料中添加枯草芽孢后能提高草鱼的增重率，降低饵料系数，但是高添加量会降低草鱼的存活率，相反低添加量可以提高草鱼的存活率。
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