三、提高纳豆激酶的方法
材料一:纳豆激酶的生产
提供一种得率高，酶活高，成本低，可进行产业化生产的纳豆激酶的生产方法。
依次包括下述两个步骤：
(一)、发酵；
所述第的发酵是固体发酵，该发酵过程依次有如下工序:
①用特制浸泡液浸泡优质黄豆，所述的特制浸泡液的配方为：牛肉浸膏5～l0g，蛋白胨4～12g，酵母浸出汁3—8g，NaCl 5～l0g，葡萄糖l5～20g，自来水l000ml，PH值为6.8～7，浸泡到黄豆吸足水份，豆无硬心，表面无皱纹为止；
②装瓶灭菌接种：采用常规灭菌方法，等瓶温自然冷却至40℃以下，在无菌条件下接种，接种所用的菌种是枯草芽孢杆菌；
③培育：采用常规培养条件；
采用高低温培养方法，先在37℃下培养22—32小时后马上转入3～10℃条件下保温，l2～24小时获得发酵物。
(二)、将经发酵步骤后得到的干燥物粉碎；
①干燥：采用常规方法。
干燥工序中采用的是将发酵物进行低温真空冷冻干燥，发酵物水分小于l5％时干燥结束。
②粉碎是采用细胞破壁技术。
上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物，其特殊之处在于：制备片剂、冲剂、硬胶囊、软胶囊或口服液时，在所得产物中直接添加可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糊精(等)配料调整至每克内有200～680的酶活单位。
上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物每克内有200～380的酶活单位，具有预防心血管疾病的作用。
上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物每克内有300～680的酶活单位，具有治疗心血管疾病的作用。
上述生产方法培养的纳豆激酶制备的冻干粉每克内含大于800的酶活单位，制备的针剂纯度达95％以上。
下面将通过实施例对方案作详细叙述：
第一部分：纳豆激酶的生产方法
1、使用特制浸泡液的实施例及其与使用常规浸泡液的产物酶活比较实验条件：300ml三角瓶加入特制浸泡液浸泡过的大豆l0g，调PH7，121℃灭菌15min，接入枯草芽孢杆菌斜面菌种，在37℃条件下培养24小时，常规干燥、常规粉碎后测定酶活。
浸泡液
例
牛肉浸膏
蛋白胨
酵母浸出液
NaCl
葡萄糖
测定酶活
特制浸泡液
1
5
4
3
5
15
平均 490 U／g
2
6
5
4
6
17
3
7
8
5
7
19
4
8
lO
6
8
16
5
9
12
8
9
20
常规浸泡液
自来水
230 u／g
2、高低温培养条件实施例及其与常规培养条件下的产物酶活比较：
实验条件：500ml三角瓶内加入经特制浸泡液浸泡过的大豆30g，调PH7，在121℃条件下灭菌30min接入枯草芽孢杆菌种子菌种培养，再经常规干燥、常规粉碎后测定酶活。
培养
培养条件
测定酶活u／g
常规培养条件
37℃条件下培养24-28小时
510
高低温
培养条件
1
37℃条件下培养24h，放入3℃条件下再培养24 h
平均
690
2
37℃条件下培养24h，放入5℃条件下再培养18 h
3
37℃条件下培养24h，放入8℃条件下再培养15 h
4
37℃条件下培养24h，放入l0℃条件下再培养12h
3、干燥与粉碎工序实施例，使用原料为经特制浸泡液浸泡，经高低温培养制得的发酵豆。
例
干燥
破碎
酶活
l
常温常压下干燥
常规方法粉碎
690u／g
2
低温真空冷冻干燥
常规方法粉碎
810 u／g
3
常规干燥
细胞破壁
780 u／g
4
低温真空冷冻干燥
细胞破壁
880 u／g
由上述实施例可以看出，使用特制浸泡液、采用高低温培养条件、采用低温真空冷冻干燥及细胞破壁技术均对提高产物酶活有重要作用。
第二部分：用于治疗心血管疾病的纳豆激酶溶栓药物
1、制备片剂、冲剂、硬胶囊、软胶囊时，在固体发酵所得产物中直接添加可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糊精等配料调整至每克内有200～680的酶活单位。
例
第一部分最终产物
添加配料
调整酶活单位
作用
用量
显效率
1
690u／g
可溶性淀粉
200u／g
预防
3g
明显
2
780u／g
麦芽糊精
250 u／g
预防
3g
明显
3
810 u／g
葡萄糖
300 u／g
预防
3g
明显
4
880u／g
葡萄糖
350U/g
预防
3g
明显
5
780 u／g
可溶性淀粉
500u／g
治疗
3g
明显
6
690u／g
葡萄糖
560u／g
治疗
3g
明显
7
810u／g
麦芽糊精
380 u／g
治疗
3g
明显
8
880 u／g
葡萄糖
680 u／g
治疗
3g
明显
用量到18克即有明显效果：预防时，l日1次，每次3克；治疗时，l日
2次，每次3克。
2、用常规方法制备的冻干粉。
例
第一部分最终产物
调整酶活单位
作用
用量
显效率
1
690u／g
200u／g
治疗
3g
明显
2
780u／g
250u／g
治疗
3g
明显
3
810 u／g
300 u／g
治疗
3g
明显
4
880u／g
350u／g
治疗
3g
明显
用量到l8克即有明显治疗效果，按病情由轻至重依次按实施例1-4确定
具体的用量数，1日2次，每次3克，共6次，
3、用常规方法制备的针剂。
例
第一部分最终产物
调整酶活单位
作用
用量
显效率
1
690u／g
800u／g
治疗
lg
明显
2
780u／g
850 u／g
治疗
lg
明显
3
810 u／g
900 u／g
治疗
lg
明显
4
880u／g
950u／g
治疗
lg
明显
用量到18克即有明显治疗效果，按病情由轻至重依次按实施例1~4确定具体的用法
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