中性粒细胞碱性磷酸酶染色

中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是其胞质特殊颗粒释放的一种在碱性条件（pH9.3～9.6）能催化各种醇和酚的单磷酸酯水解的非特异性水解酶。NAP主要存在于成熟阶段的中性粒细胞（中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细胞），其他细胞基本呈阴性。 NAP活力可反映成熟粒细胞的成熟程度和功能，随着细胞的成熟，酶的活性也逐渐增强。当中性粒细胞活化后，NAP阳性率及积分升高。在病理情况下，NAP活性的变化常有助于某些疾病的诊断和鉴别诊断。

方法与原理

以前，NAP染色多使用钙-钴法，但该法操作繁琐并所需时间长。现ICSH推荐使用Kaplow偶氮偶联法，该法的试剂盒具有操作方便、染色时间短等优点。

Kaplow偶氮偶联法的原理：成熟中性粒细胞碱性磷酸酶在pH9.6左右的碱性环境中，能水解基质液中的磷酸萘酚钠底物，释放出萘酚，后者与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质酶活性所在之处。

染色步骤

按试剂盒要求配制基质液，染色步骤通常分为固定、与基质液作用和复染三个步骤。

结果判断

阳性

细胞胞质中有棕红色或紫黑色颗粒。

NAP阳性率和积分值计算

在油镜下计数100个成熟中性粒细胞（包括中性分叶核粒细胞和中性杆状核粒细胞），分别记录其分级情况（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++），全部阳性反应的细胞之和即为阳性率，并计算其总积分值。

0分（-）：无阳性颗粒。

1分（+）：弥漫浅色或少量阳性颗粒。

2分（++）：弥漫着色或中等量阳性颗粒。

3分（+++）：弥漫深色或较多量阳性颗粒。。

4分（++++）：阳性颗粒充满整个胞质区域。

参考值

NAP的积分参考值，文献报道相差悬殊，或35～70分或7-51分等等，这与试剂的种类、质量，分值判断标准模糊以及检验者的主观因素影响较大等有关，建议各单位应建立本实验室参考值。

临床意义

当NAP积分明显增高或明显减低时其临床意义较大，同时要排除生理性影响。

一、生理性变化

1、年龄变化：新生儿NAP活性增加，以后下降。儿童各年龄大致相似，成人较儿童活性减低，老年人更低。

2、应激状态下变化：紧张、恐怖、激烈运动等NAP活性可增加。

3、月经周期中变化：经前期增高，行经后降低，经后期恢复。

4、妊娠期变化：妊娠2～3个月的NAP积分值轻度增高，以后逐月增高，分娩时达高峰，产后则恢复正常。

二、病理性变化

1、NAP积分增加：细菌性感染、再生障碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗后等。

2、NAP积分下降：慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合征、恶性组织细胞病等。

三、在疾病鉴别中应用

1、类白血病反应（明显升高）和慢性粒细胞性白血病慢性期（明显下降甚至零分）。

2、慢性中性粒细胞白血病（明显升高）和慢性粒细胞白血病慢性期（明显下降甚至零分）。

3、细菌性感染（明显升高）和病毒性感染（正常）。

4、再生障碍性贫血（常升高）和阵发性睡眠性血红蛋白尿（常下降）。

5、急性淋巴细胞白血病（常升高）、急性粒细胞白血病（常下降）、急性单核细胞白血病（不一定）。

6、恶性淋巴瘤（常升高）和恶性组织细胞病（常下降）。

7、反应性组织细胞增多症（正常）和恶性组织细胞病（常下降）。

8、真性红细胞增多症（常升高）和继发性红细胞增多症（正常）。

9、原发性血小板增多症（常升高）和继发性血小板增多症（正常）。