高通量测序原理篇-Illumina测序原理1

高通量测序给癌症筛查、癌症病人复发情况监测以及肿瘤外科切除术后残存癌细胞的检出带来新的希望。那么让我们谈谈到底什么是高通量测序。

1、Flowcell

Illumina公司是当今最红火的二代测序公司，它的测序的最基本的技术原理是基于可逆终止的、荧光标记dNTP来做边合成、边测序的工作。

Flowcell，“流动池”，一个象载玻片大小的芯片。这个芯片里面，做了8条通道。在这个通道的内表面做了专门的化学修饰。它的化学修饰，主要是2种DNA引物，把它（2种DNA引物）种在玻璃表面，这2种引物和接下来要测序的DNA文库的接头序列相互互补的，而且这两种引物是通过共价键连到Flowcell上去，之所以要有共价键连到Flowcell上，是因为有接下来有大量的液体要流过这个Flowcell。只有有共价键连接的这些DNA，才不会被冲掉。

2、文库和文库的制作

所谓的DNA文库，实际上是许多个DNA片段，在两头接上了特定的DNA接头，形成的DNA混合物，文库有2个特点：

第一个特点，是当中这一段插入的DNA，它的序列是各种各样的；

第二个特点，它的两头的接头序列，是已知的，而且是人工特地加上去的；

要做这个文库，首先是把基因组DNA，用超声波打断，然后打断之后在两头用酶把它补平，在用Klenow酶在3’端加上一个A碱基，然后在用连接酶把特定的接头给连上去。连好了接头的混合物就称为一个“文库”，英文也称作“library”。