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防己及其混伪品的鉴别方法
    中药防己始载于《神龙本草经》,并列为中品。2005版《中华人民共和国药典》规定,防己为防己科植物粉防己的干燥根,主要有效成分为粉防己碱、去甲基粉防己碱、轮环藤酚碱、防己诺林碱等,具有利水消肿、祛风止痛作用。由于防己的来源复杂,品种较多,各地的用药习惯不同,造成同物异名或同名异物的现象非常严重。由于野生资源愈来愈少,价格升高,药农误采或有意混采等多种原因,造成市场上经常出现以同属植物的根冒充防己,或用马兜铃科植物的根或茎与防己混用等,这些药材与正品防己的功效、主治相差很大,不应作为代用品。作为防己的混伪品一般具有以下特点:①植物分类学上亲缘较近;②性状与防己相似,易混淆;③性味或有些化学成分相似,但不完全一样。笔者参考了近年来国内外对防己鉴别研究的文献,其混伪品主要有木防己、湘防己、头花千金藤、青藤、平昌防己、江南地不容、广防己、耳叶马兜铃、冕宁防己、汉中防己、大叶马兜铃、川防己、宜宾防己、小果微花藤、瘤枝微花藤、洛防己、丝石竹、天花粉、拐子药以及毛青藤、毛防己、华防己、圆叶木防己、华千金藤、圆叶千金藤、雅丽千金藤、樟叶木防己、马兴马兜铃、金钱吊乌龟、蝙蝠葛、银袋、金果榄、山药、三叶木通、卵叶马兜铃、粉背轮环藤等
1性状鉴别
    主要从以下几个方面鉴别:根的形状、大小;表面颜色、质地、附着物;栓皮的厚薄;质地轻重,坚实度;断面的形状、颜色、粉性;形成层环是否明显,木部与皮部所占的比例;放射纹理的形状、颜色、疏密;气味。白仲梅将粉防己与8个混伪品分别画出其横断面进行了鉴别。
1.1粉防己:体肥满,多弯曲不直形如猪大肠;质坚实、体重,断面平坦细腻,富粉性;皮部与木部的分界清晰;形成层环明显,有稀疏自中心向外的灰棕色放射纹,无髓。
1.2木防己:防己科植物木防己的干燥根,质较坚硬,折断面不平坦,断面无粉性;皮部极薄,木部宽广,几乎全部木化,有黄色放射状的狭窄导管群穿过;中心无髓。
1.3湘防己:防己科植物秤钩风的干燥根,体重,质极坚硬,柴性,不易折断,易纵向掰断;皮部薄,木部有多数小孔及2~7个偏心性环纹;根基和根茎的断面有髓。
1.4头花千金藤:防己科植物头花千金藤的干燥块根,体重,断面富粉性;中央有一正常的木质部束,其外缘可见数轮排列近环状的突起小点。
1.5青藤:防己科植物青藤的干燥藤茎,质硬而脆,易折断,断面不平坦,无粉性;皮部窄,木部宽广,木质部束与木射线形成稀疏的放射纹;髓部淡黄白色或黄棕色。
1.6平昌防己:防己科植物轮环藤的干燥根,质坚脆,断面木质部偏心性,导管束放射状排列。
1.7江南地不容:防己科植物江南地不容的干燥根,质硬脆,易折断,断面黄白色,带粉性;维管束呈放射状排列。
1.8广防己:马兜铃科植物广防己的干燥根,体重,质坚硬,不易折断,断面粉性;木部占大部分,导管束向外呈2岐分叉,有灰棕色放射纹理;中心髓部有一类圆形的异常构造。
1.9耳叶马兜铃:马兜铃科植物耳叶马兜铃的干燥根,质较坚硬,不易折断;断面粉性差;皮部厚,易剥落,木部射线向外一级分叉多,二级分叉少;中心有髓。
1.10冕宁防己:马兜铃科植物穆坪马兜铃的干燥根,体轻,质硬,不易折断;断面粉性差;皮部厚,木部有密集的放射纹理向外呈树枝状2级分叉,导管排列成同心环状;髓部不明显,呈点状或短线状。摩擦栓皮有樟脑样臭。
1.11汉中防己:马兜铃科植物异叶马兜铃的干燥根,质硬,不易折断,断面不平坦,刺状,粉性;皮部较厚,木质部可见放射状导管群,导管群在中央方向多联合成束向外呈2岐或多岐分叉。
1.12大叶马兜铃:马兜铃科植物大叶马兜铃的干燥根或根茎,体轻,质硬,不易折断,断面不平坦,木质性,呈放射状不平整的层片状;木部宽广,射线较窄,中心有小型的髓。
1.13川防己:马兜铃科植物川南马兜铃的干燥块根,断面富粉性,具香气;皮部与木部间有一明显的灰黑色线状环纹,中柱有类圆形或三角形的“云锦”状纹理。
1.14宜宾防己:马兜铃科植物树岗马兜铃的干燥块根,体重,质坚实,不易折断,富粉性;皮部与木部间有一明显灰黑色的线状环纹,  有异形维管束多个;可见数圈灰褐色的环纹和断续的放射状条纹。
1.15小果微花藤:茶茱萸科植物小果微花藤的干燥根,体重,质坚实,不易折断,断面富粉性;皮部外侧具黄棕色斑点,木射线无黄棕色斑点,木部具黄白相间的放射纹理或放射纹理仅在木部外侧。
1.16瘤枝微花藤:茶茱萸科植物瘤枝微花藤的干燥根,质坚硬,不易折断,断面粉性差;皮部窄,皮部和木射线密布黄棕色斑点。木部有明显放射纹。
1.17洛防己:木通科植物三叶木通的干燥根,质坚韧,柴性,不易折断;断面不平坦,片状或纤维状;皮部黄白色,常分离脱落,木部宽广,层片状,有放射状纹理;中央髓部圆形而大。
1.18丝石竹:石竹科植物霞草的干燥根,质坚硬,难折断;断面可见有3~4轮异型维管束排列成黄白相间的同心性环纹。
1.19天花粉:葫芦科植物栝楼的干燥根,质坚实,断面富粉性,可见黄色小孔(导管)略呈放射状排列。
1.20拐子药:毛莨科植物单叶铁线莲的干燥根,外形似“大肠”,断面粉性强,放射纹理稀少。
2显微鉴别
    观察根或茎的横切面,主要包括:木栓细胞的列数、形状、颜色;皮层薄壁细胞的形状;石细胞的形状、存在方式;韧皮部与次生木质部的构造,形成层,次生木质部占整个根的比例;导管的多少,射线的宽窄;薄壁细胞中的淀粉粒的多少;草酸钙结晶的形状、多少;有无髓以及髓的形状、大小等。观察粉末的颜色,包括淀粉粒的有无、多少、形状;草酸钙结晶的形状、多少;石细胞的有无及多少等。
2.1粉防己:①横切面:皮层散有石细胞群,较稀疏;木质部占大部分,射线较宽;薄壁细胞中充满淀粉粒,并含少量细小杆状草酸钙结晶和少量的小方晶;形成层成环,中央无髓。②粉末:淀粉粒众多,石细胞散在,有少而小的杆状草酸钙结晶:混伪品则是簇晶或方晶或针晶或砂晶或没有草酸钙结晶。
2.2木防己:①横切面:石细胞众多,连续排列成环;石细胞腔内含草酸钙方晶及淀粉粒;形成层不明显;薄壁细胞含众多草酸钙方晶。②粉末:石细胞众多,淀粉粒极多,薄壁细胞含草酸钙方晶。
2.3湘防己:①横切面:皮层有单个或成群的石细胞;中柱维管组织为异型构造;中柱鞘为石细胞群排列成环,木化,中柱鞘与维管束交错排列成2~7轮偏心性环纹,每环外侧有石细胞环带,与韧皮射线石细胞相连;有的石细胞含数个草酸钙方晶。②粉末:薄壁细胞含草酸钙方晶,石细胞多。
2.4头花千金藤:①横切面:栓内层石细胞很少;薄壁细胞内含多数淀粉粒以及草酸钙方晶及细小针晶;皮层散有少数石细胞,中柱占根的大部分,具三生构造,有多数外韧型的异常维管束排列成2~4个同心环状;中央有正常维管束,木质部导管旁有多数木纤维及少数管胞,呈放射状排列。②粉末:薄壁细胞含草酸钙方晶及细小针晶,并含多数淀粉粒。
2.5青藤:①横切面:皮层散有纤维和石细胞,中柱鞘纤维群新月形,其内侧有石细胞群,并与射线中的石细胞群连成波状环;韧皮射线和髓部有分枝状石细胞,薄壁细胞含淀粉粒和多而小草酸钙针晶,髓部小。②粉末:石细胞极多,薄壁细胞中的草酸钙针晶多而小。
2.6平昌防己:横切面的中柱鞘为断续石细胞环带,韧皮部狭窄,木质部发达,占根大部,偏心性;薄壁细胞、石细胞含草酸钙小方晶,偶见呈小棒状。
2.7江南地不容:横切面的栓内层有石细胞群散在,中柱占根的大部分,有三生构造,外韧型维管束小型,断续排列呈数轮;薄壁细胞主含棒晶,有少量针晶、板片结晶,淀粉粒多单粒。
2.8广防己:①横切面:栓内层内侧有石细胞断续排列成环,韧皮部外侧有石细胞散在,复合异型维管束环列;皮层外侧有石细胞环带,中柱鞘部位无纤维束,韧皮部无分泌腔;石细胞群断续排列成环,薄壁细胞中充满淀粉粒,可见草酸钙簇晶,形成层环明显;髓部狭小,髓部有异形维管束。②粉末:薄壁细胞含草酸钙簇晶。
2.9耳叶马兜铃:①横切面:皮层内有石细胞群断续排列成环;皮层和韧皮部内均有分泌细胞散在,薄壁细胞有草酸钙方晶、棱晶或少量板状结晶,形成层成环,髓部小。②粉末:薄壁细胞含草酸钙方晶,粉末中有分泌细胞。
2.10冕宁马兜铃:①横切面:石细胞众多,中柱鞘部位有纤维群和石细胞群,断续环列;韧皮部有椭圆形分泌腔,形成层不甚明显;木质部宽广,薄壁细胞和射线细胞含众多草酸钙簇晶,淀粉粒少;髓部窄,髓部常压缩成短棒状。②粉末:淀粉粒稀少,薄壁细胞含草酸钙簇晶。
2.11汉中防己:横切面的皮层窄,石细胞群断续排列成环,有少量纤维束;形成层环明显,木质部比例大,髓射线中也可见石细胞。薄壁细胞含大量草酸钙簇晶及淀粉粒;髓部小。
2。12大叶马兜铃:①横切面:皮层有厚壁细胞,中柱鞘部位有3~7列木化纤维排列成环,维管束外韧型,环列,导管多单个散在,中央有髓。薄壁细胞含草酸钙簇晶。②粉末:淀粉粒多,草酸钙簇晶多,石细胞多成群,鲜黄色。
2.13川防己:①横切面:皮层外侧石细胞群断续排列成环,中央有一大型异常维管束,其外有l0~20个异常维管束散在;形成层呈不规则多角形环,有草酸钙簇晶,髓部较大。②粉末:川防己薄壁细胞含淀粉粒和草酸钙簇晶,淀粉粒多为单粒。
2.14宜宾防己:横切面的栓内层内侧有石细胞2~10余个成群断续排列成环带,中柱占根的极大部分,形成层明显;异型维管束明显,不规则排列,约12~30个散在;草酸钙簇晶集中分布在栓内层细胞,薄壁细胞含淀粉粒。髓部宽广。
2.15小果微花藤:①横切面:薄壁细胞含大量的革酸钙簇晶和淀粉粒;紧靠栓内层有断续排列的石细胞环带,石细胞棕黄色。形成层明显。②粉末:淀粉粒极多,草酸钙簇晶众多,石细胞黄色。
2.16瘤枝微花藤:①横切面:栓内层有断续排列的石细胞环带,石细胞黄色。形成层成环。薄壁细胞含较多草酸钙簇晶和砂晶和淀粉粒。②粉末:石细胞众多,薄壁细胞含草酸钙簇晶、砂晶。
2.17洛防己:横切面的栓内层为一石细胞环带组成,薄壁细胞含黄棕色物,中柱宽广,由l0余个维管束组成,维管束外韧型,束外有一中柱鞘纤维,韧皮部窄,木部宽广,薄壁细胞及射线细胞中含淀粉粒和草酸钙方晶。髓部圆形而大,有时中空。
2.18丝石竹:①横切面:皮层宽广,有数层由异型维管束构成的同心性环纹;外韧内木,薄壁细胞有大量草酸钙簇晶。②粉末:丝石竹有大量草酸钙簇晶及砂晶。
2.19天花粉:①横切面:皮层有。1~4列石细胞断续排列成环,形成层不明显,木质部宽广,次生木质部束常排列为1次二歧状,薄壁细胞富含淀粉粒,不含草酸钙结晶。②粉末:淀粉粒复粒由2~8分粒组成,常有1个大的盔帽形分粒下端与10多个小分粒复合。
2.20拐子药:①横切面:皮层窄,石细胞较多,木质部宽广,占根的绝大部分,导管极为稀疏,径向断续排列成放射状,薄壁细胞无草酸钙结晶。②粉末:石细胞众多,没有草酸钙结晶。
3理化鉴别
3.1薄层色谱法:薄层色谱法能定性反映不同科属所含化学成分的差异,提取这些差异特征,使定性信息数量化,通过分类可较准确地用于定性鉴别。薄层色谱分析发现,防己、湘防己等含粉防己碱、防己诺林碱;广防己、耳叶马兜铃、川防己、冕宁防己、汉中防己、大叶马兜铃、小果微花藤、瘤枝微花藤、拐子药等不含这两种生物碱;平昌防己含防己诺林碱,不含粉防己碱。以马兜铃酸为对照品,广防己、川南马兜铃、穆坪马兜铃、异叶马兜铃的薄层色谱不同。杨晖的薄层色谱显示,湘防己含为粉防己碱、去甲基粉防己碱;江南地不容含粉防己碱;木防己、平昌防己则不含。以瓜氨酸为对照品,天花粉与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。广防己与耳叶马兜铃的薄层色谱斑点数目及颜色存在明显差异,表明即使同科属植物的化学成分也不尽相同。
3.2理化反应:天花粉中有蛋白质反应,防己有粉防己碱反应。防己显蓝紫色,渐变绿色至污绿色,放置后颜色加深;大叶马兜铃显淡蓝色,放置无变化。小果微花藤和瘤枝微花藤均显浅棕色,放置后渐显深棕色El01。丝石竹有明显的泡沫反应;广防己含酮类,有特征性反应。
3.3  紫外光谱鉴别:防己科的混伪品所含化学成分与防己相似,在亲缘关系较近、成分相差不大的情况下,用紫外光谱组(4种溶剂紫外光谱法)分别检测数种不同极性溶剂提取液紫外吸收,通过综合比较其图谱差异,可获得较好的鉴别效果。韦红军等报道,汉中防己和防己的紫外光谱吸收峰不一样。丝石竹的紫外光谱在(196.70±0.50)nm没有最大吸收峰,防己在(280±2)min出现最大吸收峰,拐子药在(257±2)nm出现最大吸收峰。粉防己、木防己、小果微花藤的紫外光谱图像显示,最大吸收峰、峰位值均有差异,各具特征性。
3.4红外光谱(FTIR)鉴别:粉防己与头花千金藤为同科同属植物,所含主要化学成分的母核相同,故在FTIR吸收峰比较接近。但两者的FTIR图形中有差别,特别是饱和c—H键伸缩振动区域的吸收外形(约2828 cm-1)差别很大,在此区域与1241 cm_1处,头花千金藤的吸收强度大于粉防己。头花千金藤的吸收峰在1047 cm-1粉防己在1416 cm-1、l338~1416 cm-1区域的吸收峰形不同。且在指纹区1300~650 cml的吸收两者亦有明显差别。
4化学成分
    粉防己生物碱主要为粉防己碱(汉防己甲素)、防己诺林碱、去甲基粉防己碱(汉防己乙素)、轮环藤酚碱等。湘防己的主要化学成分是去甲基粉防己碱、粉防己碱、木兰碱等。木防己主要含木防己碱、异防己碱、木防己胺、木兰碱、木防己新碱等。江南地不容含异粒枝碱、轮环藤宁碱、头花千金藤碱、左旋箭毒碱、异紫堇定等。青藤茎根含青风藤碱、尖防己碱、白兰花碱、光千金藤碱、青藤碱、双青藤碱、木兰花碱、异青藤碱等。平昌防己含左旋箭毒碱、异粒枝碱、防已诺林碱、异粉防己碱、轮环藤宁碱、木兰碱及轮环藤酚碱。
    其他科的混伪品不含粉防己碱、防己诺林碱、去甲基粉防己碱。江南地不容根含轮环藤宁碱、头花千金藤碱、及小檗胺等生物碱。马兜铃科植物广防己主要含马兜铃酸、马兜铃酸内酰胺、马兜铃酸A、马兜铃酸B、木兰花碱及尿囊素等。汉中防己、川防己主含马兜铃酸等成分。在各种马兜铃防己(宣宾防己、广防己、冕宁防己、汉中防己)中,以冕宁防己的马兜铃酸A含量最高、汉中防己最低。茶茱萸科植物不含粉防己碱、防己诺林碱、马兜铃酸。天花粉含天花粉蛋白及多种氨基酸、多糖等。
5结语
    防己的混伪品种类复杂,以上几种方法分别从不同角度对防己及其混伪品进行了鉴别。但每种方法各有优缺点。如用薄层色谱很难分开正品与伪品,因为其化学成分相似,仅以粉防己碱与防己诺林碱做对照品是不够的,防己中的防己诺林碱含量很低,薄层中有时出现假阴性。笔者认为应加上去甲基粉防己碱三个对照品进行对照。粉防己含生物碱,不含马兜铃酸,而马兜铃科的混伪品含马兜铃酸,有肾毒性;所以可设马兜铃酸的限量检查排除马兜铃科防己。用高压液相色谱法检测,马兜铃科防己(宜宾防己、广防己、冕宁防己、汉中防己)均含马兜铃酸A,而粉防己则不含。粉末显微鉴别法为简便、实用的鉴别方法:只有正品防己有小杆状草酸钙结晶,而其他混伪品没有这一特征。含量测定可选用高压液相色谱法,有条件的还可增加指纹图谱。目前对防己及其混伪品的鉴别研究中,应将有效成分的提取、薄层色谱法、紫外光谱法等应用其中,使鉴别工作更趋于规范化。产供销单位应注意鉴别,避免混伪品流入市场给患者带来身体伤害。

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