蛋白定量的方法除了ELISA和WB，Luminex xMAP 技术了解一下！

蛋白定量的方法很多，大家最为熟悉的就是ELISA和WB了，下面我们来介绍一个新方法——Luminex xMAP技术。

（一）Luminex多因子定量分析技术

1、Luminex多因子定量分析技术发展历程

1997年	Clinical Chemisty杂志介绍Luminex技术
2001年	Luminex技术获美国FDA认证，成为唯一得到FDA许可的用于临床诊断的多指标检测技术
2005年6月	基于Luminex技术的文章发表在“Nature”杂志上
2005年11月	全球科技产业研究权威机构Frost&Sullivan授予Luminex技术“年度国际临床诊断技术革新大奖”

2、原理

Luminex多因子液相分析技术（Luminex xMAP），工作原理是将2种不同的荧光素加入微球中，根据不同的比例将微球（聚苯乙烯微珠或超顺磁的微珠）Luminex 筛选和性能分析检测采用颜色编码的，这些微珠包被有对目标分析物特异性的抗体。

首先，能识别不同目标分析物的微珠混合后与待检样本孵育。微珠捕获到分析物后，分为100种，形成二维矩阵（图一），

图一

将不同捕获抗体包被在不同荧光强度的微球上形成捕获微球，和待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品中相应的抗原或蛋白结合，再经由多个生物素标记的特异性检测抗体混合物识别，再与链霉亲和素-PE荧光素结合，形成“三明治”夹心复合物（图二），

图二

在流式系统上通过检测微球荧光强度的差异对目的蛋白定性，检测抗体是带有PE荧光素标记的，通过检测抗体的荧光信号强度定量目的蛋白（图三，有2束激发光，633nm的激发光识别编码微球，532nm的激发光激发检测抗体上的PE荧光，用于反应结果识别）。

图三

也被称作高通量的ELISA，二者的区别见（图四）。

图四

3、Luminex检测平台

4、Luminex检测平台操作流程

5、应用

应用领域	分析物类型
免疫	细胞因子
炎症	炎症因子
心血管疾病	趋化因子
肿瘤	粘附因子
肾毒性	脂肪因子
代谢	血管生成蛋白
神经	肿瘤标记物
细胞间作用	基质金属蛋白酶
………	………

案例分享：

（1）卵巢癌早期多指标筛选

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20368574

通过Luminex多因子检测将CA-125、HE4、CEA、VCAM-1作为早期筛查卵巢癌的指标。

（2）乳腺癌进展Biomarker筛选

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20368574

通过Luminex多因子检测将MMP-9/NGAL作为乳腺癌进展评估的筛查的Biomarker。