Minigene验证服务

1.Minigene技术简介

可变剪接是调节基因表达和产生蛋白质多样性的重要机制，是导致真核生物基因和蛋白质数量较大差异的重要原因，Pre-mRNA剪接是真核生物基因表达的关键步骤，其剪接异常直接影响蛋白的结构和功能。随着新一代测序技术的发展，大量的潜在致病变异被发现，根据文献报道，大约1/3的致病变异会导致pre-mRNA剪接异常，且大部分致病变异的临床意义是未知的。

Minigene技术是一种研究基因变异对可变剪接影响的体外功能验证技术。该技术通过将带有变异基因的外显子片段的质粒载体转染细胞后，利用RT-PCR及Sanger测序检测异常mRNA产物，进而分析基因变异对pre-mRNA可变剪接的影响（如内含子保留和外显子切除）。

2.Minigene技术原理

3.Minigene技术应用案例1

案例1：Minigene技术验证成人原发性肌张力障碍THAP1基因突变导致剪切异常

Vemula S R, Xiao J, Zhao Y, et al. A raresequence variant in intron 1 of THAP1 is associated with primary dystonia[J].Molecular Genetics & Genomic Medicine, 2014, 2(3):261-272.

THAP1： c.71 + 9 C>A变异（内含子上点突变），造成剪切异常，导致2号外显子不完全剪切，3号外显子增加，从而影响细胞生长周期。

3.Minigene技术应用案例2

案例2：Minigene技术验证瓜氨酸血症ASS1基因变异导致可变剪接异常

KimaniJ K, Wei T, Chol K,et al. Functional analysis of novel splicing and missense mutations identifiedin the ASS1,gene in classical citrullinemiapatients[J]. ClinicaChimicaActa,2015, 438:323-329

家族1：ASS1c.174+1G变异（内含子上点突变），造成剪切异常，4号Exon跳跃，生成截短蛋白； c.422T>G变异（外显子上点突变），造成两种剪接异常，7号Exon跳跃和7号Exon不完全剪切。

3.Minigene技术应用案例3

家族2：ASS1c.773+1G>A变异，造成两种剪接异常，即11号Exon跳跃和11号内含子保留，c.793C>T变异未引起异常剪接。

项目周期：6-8周

客户提供：携带检测突变的DNA样本，正常DNA样本

结果交付：

（1）构建的载体；

（2）实验报告：包括实验步骤，引物序列，测序峰图，结果图片和分析结果