文章题目：Using antigen-specific B cells to combine antibody and T-cell based cancer immunotherapy
研究人员：American Association for Cancer Research.
发表时间：2017.08
期刊名称：Cancer Research
影响因子：9.122研究背景
癌症免疫治疗在治疗血液病和恶性肿瘤方面取得了成功，大多数的研究都集中在诱导T细胞介导的肿瘤免疫等方面，免疫检验点阻滞抗原的研究也已取得良好进展。此外，基因工程T细胞引入嵌合抗原受体也有很好的临床效果。
本文介绍了一种替代方法，可以避免基因工程这一过程，并且能够通过接种疫苗激活特异性T细胞活性。正常B细胞的CD40-活化通过改善抗原呈递，诱导特异性幼稚或记忆CD4+和CD8+T细胞反应。与DC疫苗相比，CD40活化的B细胞（CD40B细胞）可以从少量外周血中大量扩增。这些CD40B细胞归巢于肿瘤引流淋巴结（TDLN），并在小鼠中诱导抗肿瘤免疫。
然而，目前只有B细胞多克隆特异性被用于CD40激活和肿瘤靶向的研究，没有考虑B细胞的两个主要优点：特异性B细胞受体（BCR）对其抗原的高亲和力和产生大量特异性抗体的能力。通过开发可以在GMP级别中产生的CD40激活剂，克服了在临床试验中使用CD40B细胞的障碍。因此，我们假设基于肿瘤抗原的CD40B细胞疫苗是有希望用于癌症治疗的。我们发现具有确定的特异性的鼠和人B细胞可以被富集，结合B细胞介导的T细胞活化和抗体介导的抗肿瘤作用的双功能后可用于癌症免疫治疗。
研究方法
样本选择：
经过献血者同意，从血样中得到血沉棕黄层
购买C57BL / 6小鼠、Luc + C57BL / 6小鼠、OT-I和OT-II小鼠，并将小鼠置于特定无病原条件下
准备相关细胞：
a) 淋巴细胞的分离
b) 抗原特异性B细胞的分离
c) 成熟树突细胞的产生
d) CD40细胞的生成
e) 产生抗体分泌浆细胞
生物学分析：
a) 抗原呈递分析
b) 荧光分析
c) 抗体的定量和亲和力测定
d) 抗体依赖性细胞毒性测定
空白小鼠的体内免疫:
C57BL/6或Luc+小鼠腹腔内免疫。在20μM OVA蛋白中的100μl +不完全弗氏佐剂（IFA）（Sigma Aldrich）作用下OVA特异性B细胞。对于细胞亚群免疫方面，是将APC在37℃下外源负载10μMOVA蛋白质1小时。
体内细胞毒性测定:
靶细胞通过Pancoll从C57BL/6小鼠的脾脏中分离淋巴细胞，并用2μM CFSE或20μM CFSE标记。用10μM OVA肽（SIINFEKL）在37℃下将20μM CFSE群体脉冲1小时。在小鼠免疫后第21天，将低和高CFSE淋巴细胞1：1混合并进行腹膜内注射。24小时后，取出脾脏并分析杀死肽脉冲靶细胞的原因。通过将低CFSE细胞的百分比除以高CFSE细胞的百分比来确定未脉冲与脉冲（RatioUP）靶细胞的比例。特异性裂解通过以下公式计算：％特异性裂解=1-（RatioUP阴性对照/比例免疫）* 100。
体内迁移：
来自Luc+小鼠的鼠CD19+ B细胞或CD40B细胞静脉注射到同基因小鼠体内。通过在250ml 1x PBS中注射7.5mg D-荧光素以进行Luc+ B细胞的检测。在Xenogen IVIS 200（Perkin Elmer）中进行成像。在37℃下，1.5-4％异氟烷酸可使小鼠完全处于麻醉状态。使用Living Image Software（Perkin Elmer）对生物荧光图片进行分析。
T细胞耗竭：
肿瘤激发后的第5天和第25天，对小鼠进行250μg抗CD4单克隆细胞YTS191.1和YTA3.1的注射，或500μg抗CD8单克隆细胞YTA 169.4的注射。在注射抗体后，通过连续5天从尾静脉取100μl血液来控制有效的消耗，并通过流式细胞术确定CD4 +或CD8 + T细胞的百分比。
研究成果
鼠抗原特异性B细胞显示类转换和活化表型
与同一小鼠的非OVA特异性B细胞相比，这些OVA特异性B细胞（OVA-B细胞）显示较高水平的活化标记物CD86，MHCI和MHCII（图C）。 OVA-B细胞上调表面IgG1的表达和IgD和IgM的下调表达（图D），表明活化和转换的表型。
图1 鼠抗原特异性B细胞显示类转换和活化表型
用抗原特异性CD40B细胞进行疫苗接种诱导抗原特异性T细胞应答
如图2，与未受刺激的对照组相比，OVA-CD40B细胞表现出更高的活化表达，诸如CD80，CD86，MHCI和MHCII的标记。
图2 OVA-CD40B细胞与对照组
如图3，OVA蛋白质脉冲纯化的OVA-CD40B与来自OT-II或OT-I小鼠的抗原特异性CD4 +和CD8 + T细胞的共培养，与多克隆CD40B细胞相比，均增加了T细胞的增殖。结果表明抗原特异性CD40B细胞是抗原特异性T细胞应答的有效诱导剂。
图3 共培养
抗原特异性CD40B细胞迁移到次级淋巴器官和肿瘤部位
图4 OVA特异性Luc + CD40B细胞在注射后12小时内出现在脾脏中，然后在接下来的5天内迁移到腹部淋巴结。
图5 在具有表达OVA的E.G7-淋巴瘤的小鼠中，多克隆CD40B细胞归巢于脾脏，但相对于腹部淋巴结优先累积在TDLN中
图6 OVA-CD40B细胞在36小时内迁移到脾脏和TDLN
与同一小鼠的非OVA-B细胞相比，OVA-B细胞中CXCR4和CCR7上调。但CXCR5和CD62L在OVA-B细胞中没有显著改变。这种表达模式与二级淋巴器官中T细胞富集区的归巢一致。
抗原特异性CD40B细胞与抗原特异性浆细胞协同治疗癌症
与用DC或多克隆CD40B细胞免疫的小鼠相比，用OVA-CD40B细胞处理的小鼠中的肿瘤生长减少并且存活延长。与单独用DC或OVA-CD40B细胞免疫的小鼠相比，OVA-CD40B细胞和PC的联合治疗在保护小鼠免受肿瘤攻击和延迟肿瘤生长方面是表现优异，同时延长生存时间。
这些结果表明协同B细胞效应功能开发用于癌症免疫治疗方案是具有治疗价值的。
讨论
我们的研究结果表明，肿瘤抗原的同源呈递和肿瘤反应性抗体的组合能够诱导缓解肿瘤发展的抗肿瘤免疫。 我们的方法能够从少量外周血B细胞同时产生有肿瘤特异性抗原的抗原呈递B细胞和产生抗体的浆细胞。 本研究提供了鼠肿瘤模型的原理证明，为临床评估B细胞免疫治疗平台提供了依据。
译者观点
癌症免疫治疗为癌症治疗提供了一个新的充满希望的方向。临床上主要应用的有PD-1/PD-L1抗体和CAR-T等。然而，只有约20％的患者对检查点封锁表现出应，CAR-T也会存在细胞因子风暴的问题。B细胞在癌症免疫治疗上的作用为其提供了一个新的方向和更多联合治疗的可能，但是该文章的研究还停留在初始阶段仍需要后续的实验验证和临床实验。
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