拼了洪荒之力熬夜看文献，却对自己辛苦整理的取样方法有所迟疑，恨不得前方有一位高能的师兄师姐带我飞！
卯足了劲，准备开工，却在关键时刻，缺这个少那个的，好希望旁边有个贴心的师妹儿唯我马首是瞻！
不要慌！为了解决您的燃眉之急和助力2019国自然基金申请，小锐特此献出多年来在微生物组研究领域总结整理的取样建议和注意事项！供君参考！
确认样本入组条件
首先，取样前，依据研究目的和研究内容，确认入组样本满足的需求及所有的特征属性；一般情况下，微生物研究入组样本排除标准如下：
① 研究对象如果包括疾病组，应排除与菌群相关的该疾病的并发症，比如糖尿病、肝病、心血管疾病、消化道疾病和一些失代偿性疾病等；如果没有办法排除，需详细记录患病情况。
② 研究对象无其他大型手术史，如胃肠切除手术史的患者等；如有，请详细记录手术情况。
③ 取样前至少1个月没有使用过抗生素[1-3]。
④ 取样前至少1个月内保持日常饮食习惯，饮食不要大幅变化[2,3]。
参考文献
[1] Palleja Albert,Mikkelsen Kristian H,Forslund Sofia K et al. Recovery of gut microbiota of healthy adults following antibiotic exposure.[J] .Nat Microbiol, 2018, 3: 1255-1265.
[2] Liang Qiaoyi,Chiu Jonathan,Chen Yingxuan et al. Fecal Bacteria Act as Novel Biomarkers for Noninvasive Diagnosis of Colorectal Cancer.[J] .Clin. Cancer Res., 2017, 23: 2061-2070.
[3] Xie Yuan-Hong,Gao Qin-Yan,Cai Guo-Xiang et al. Fecal Clostridium symbiosum for Noninvasive Detection of Early and Advanced Colorectal Cancer: Test and Validation Studies.[J] .EBioMedicine, 2017, 25: 32-40.
取样前器材准备
常用的微生物取样器材准备（以人体粪便为例）
① 准备取样所需的材料和试剂：除上述材料外，还需考虑准备离心管、手术刀、剪刀、冰盒（或冰袋）、封口膜、marker笔、A4纸和PBS缓冲液等常用材料和试剂。
② 材料和试剂准备好后，对需要灭菌的试剂耗材进行高温灭菌，尽量保证所用材料和试剂均为无菌状态。
③ 在取样前，对无菌的冻存管/采样管进行详细标记，如“样品来源（人/小鼠/大鼠）+样品名称+编号+采集人姓名+采集日期”等简洁易辨识的标记方式，注意一定要详细标记和保持字迹清晰（防止后续在储藏和运输过程中标签丢失或模糊）。
取样建议方法
取样过程中应尽可能保持无菌，隔绝一切被感染的机会；同一研究所有样本的采样方法和采样部位需保持一致，且样品一式多份，避免反复冻融！不同来源的不同部位样本取样建议详见下面文件：
拉动滑轮可查阅
更多详细的取样细节可参考：
国际人类微生物组项目HMP和IHMS是怎么取粪便样品的？（含保存液的取样方法在这里哦）
样品保存和运输
序号 | 运输、保存常见问题 | 操作方法 |
1 | 是否需要液氮速冻？ | 在条件允许情况下，可以采用液氮速冻后，立即置于-80℃冰箱或干冰中；若暂时条件不允许，也可直接置于-80℃冰箱或干冰中；注意防止反复冻融。 |
2 | 最迟多久运送回实验室，该如何操作？ | 以冰盒中的干冰/冰袋量为准，在冰融化之前及早送至实验室，若冰量不够，可暂放置于-20℃冰箱中。 |
3 | 其他注意点？ | 样品无论采取何种方式取样、运输、保存，同一研究所有样本的采样、运输、保存方式需保存一致。 |
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