上一期给大家说了一些关于R&D Quantikine® Elisa试剂盒常见的问题，以及解决的办法，大家受益颇多。那么，这一期小编又找了一些经典问题，大家快来看看吧！
试剂盒有没有对照？
R&D Systems为人的Quantikine® ELISA试剂盒(显色法)，Quantikine HS® ELISA试剂盒(高灵敏度)和 QuantiGlo® ELSA试剂盒(化学发光法)提供了三个水平的对照组。
我想使用你们目录中的重组蛋白作为我的ELISA的对照，但我发现质量上有差异。这是为什么？
首先要考虑的是重组蛋白的质量会高出试剂盒的可测试范围数倍，必须将重组蛋白稀释多次才能达到试剂盒的测试范围。一般来说是从ug/毫升稀释到pg/毫升，在这中间,稀释会导致检测的不准确性，并且稀释倍数越大，误差越大。另外移液管的误差就达到了可测量的水平。
其次要考虑的是R&D Systems的免疫分析方法测定的蛋白水平是用一种抗体捕获并用第二种抗体测定的。这种测定是在试剂盒研发时用标准蛋白校正的。这些经过测定的早期标准蛋白成为基本校正物，后来的标准都同它校正。这样不同生产批号的免疫测定试剂盒将是一致的。
一般来说，利用Quantikine®试剂盒检测蛋白浓度时期望的回收值为蛋白瓶身标示量的+/-25%。蛋白的免疫可识别量有批间差异，因此，ELISA测定蛋白浓度时，实际浓度与瓶身标示浓度也有批间差异。如果你要用这些重组蛋白来作为ELISA试验的对照,最好利用R&D Systems的ELISA测定方法来校正,而不要仅仅利用其标注的浓度来进行简单的引用。
试剂盒附带的ELISA对照品稳定性怎么样?
对照品有效(质保)期为自收到之日起6个月。它们是一次性使用的，用完丢弃。如果冻干粉保存得当，可以长期稳定保存，但无法提供确切的稳定性测试数据。R&D Systems测试的对照品稳定性是重溶后进行的。
Quantikine® ELISA平板可以分多次部分使用么?
Quantikine® ELISA平板含有可拆卸的加样孔八联排，未使用的部分可以拆下后放回带有干燥剂的铝箔袋中密封保存，可在2-8°C存放达1个月。
我能在任意时间暂停检测,或增加孵育时间，或改变推荐的孵育温度吗？
R&D Systems对孵育时间和温度都进行了优化。每个试剂盒只对说明书中描述的操作流程进行了验证。如果您用任何方式改变了操作流程，会导致我们无法为产品的结果提供质保。
休 息 一 下
精 彩 继 续
R&D Systems在研发和质控我们绝大多数的 Quantikine® ELISA试剂盒时，采用4-相参数的曲线拟合(又名为4-pl或sigmoidal曲线拟合)。一般来说，它比log-log和直线有更好的曲线拟合。如果数据分析不可用4-pl的话，log-log是下一个最好的选择。
不同试剂盒中的试剂可以换用么?
检测稀释液、校准稀释液和底物在拥有相同组分号和批次号的前提下可以换用。但是，R&D Systems进行的是”试剂盒QC”，意味着我们不支持用其他批次或来源的试剂替换试剂盒中的成分。平板和检测偶联物在任何情况下都不能换用。
两个主要的原因可能是移液误差和洗涤方式。
有些细胞分子会粘到玻璃或聚苯乙烯(polystyrene)，但不粘聚丙烯。
我加完终止液后，我的ELISA平板上的孔变为绿色的了，这是为什么？
这种情况发生的原因通常是此孔内的底物未被混合均匀。加完终止液后，请轻弹平板或将其置于平板振荡器上混匀，直至其完全变黄。
加入终止液后，我的加样孔里为什么会有棕色沉淀?
这是由于加入HRP标记的抗体(或HRP标记链霉亲和素)孵育之后洗涤不充分。残留的多余HRP经底物和随后的终止液反应，可显示桔棕或棕色沉淀。解决方法:在每次洗涤步骤后增加30s浸泡并彻底移去加样孔内所有液体。
以上文字来源于Bio-techne。
OK！今天“您问我答”到这里就结束了，如果您还有其他关于ELISA实验的问题，欢迎在下面留言哦~
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