CRISPR-Cap 使用dCas9富集特异片段

近期在 Nucleic Acids Research 上发表了来自韩国的 CRISPR-Cap 技术，通过 Cas9富集特异的 DNA 序列，实现高达300倍以上的富集，比目前的多种富集方法都有明显的优势。对于靶向测序等有着非常重要的好处。

基于PCR、杂交捕获或分子反转探针来富集基因组DNA靶区的现有方法具有各种缺点，包括实验时间长、产量和/或富集质量低。开发的CRISPR - Cap，这是一种简单且可扩展的基于CRISPR的方法，用于富集dsDNA的目标区域，只需要两个短的实验程序，两个小时就可以完成。使用CRISPR-Cap从大肠杆菌基因组DNA中平均富集10个靶基因355.7倍，最大靶上比率为81 %，富集均匀性高。使用CRISPR-Cap来测量基因拷贝数，并检测频率低至1 %的罕见等位基因。最后，还富集了人类基因组中20个基因的编码序列区域。预计CRISPR-Cap可以替代其他广泛使用的目标富集方法，这将拓宽CRISPR在目标富集领域的应用范围。

总之，CRISPR-Cap是一种无需进一步处理就可与大基因组dsDNA一起使用的方便、多重、目标富集方法。CRISPR-Cap反应时间短，效率高，没有明显的富集偏差。CRISPR-Cap还可用于定量纯化的基因组DNA样品和全细胞裂解物中小基因组DNA的基因拷贝数。CRISPR-Cap的进一步优化可能用于大基因组DNA。CRISPR-Cap还可以进行进一步的改进，进一步降低成本，例如在分选步骤中消除链霉亲和素磁珠。进一步的优化将使CRISPR-Cap作为富集人类基因组中目标DNA的方法非常有用。