从这些细胞释放的天然杀伤（NK）细胞和外泌体都通过细胞杀死蛋白质穿孔素和颗粒酶诱导肿瘤细胞的细胞毒性。肿瘤微环境中的TGFβ1蛋白产生免疫逃逸机制，使NK细胞失活。在神经母细胞瘤和TGFβ处理的NK细胞中下调的肿瘤抑制性miR-186抑制神经母细胞瘤（MYCN和AURKA）中的致癌蛋白和TGFβ途径的组分。通过NK细胞衍生的外泌体或通过纳米颗粒递送恢复神经母细胞瘤中的miR-186水平减少肿瘤负荷，促进存活，并恢复NK细胞的细胞杀伤能力，证明肿瘤抑制性miRNA在神经母细胞瘤中的治疗潜力。
4月1日佛罗里达大学药学院的Thomas D. Schmittgen在Cancer Research上发表了“Exosomal miRNA Cargo as Mediator of Immune Escape Mechanisms in Neuroblastoma”，神经母细胞瘤是婴儿中最常见的癌症，也是最常见的颅外儿童癌症。虽然神经母细胞瘤是一种相对罕见的疾病，在美国每年约有800例新病例，但高危神经母细胞瘤的5年生存率仅为40％至50％。虽然神经母细胞瘤的病因尚不完全清楚，但家族性和散发性神经母细胞瘤中存在许多遗传改变。神经母细胞瘤中最常被改变的基因是MYCN，其在所有神经母细胞瘤病例中的约25％被扩增，并且其表达与晚期疾病阶段正相关。神经母细胞瘤患者中高水平的MYCN蛋白与转移和预后不良的其他标志相关。MYCN与其他蛋白质协同工作，包括有丝分裂激酶极光激酶A（AUKRA）.AUKRA蛋白与MYCN结合并通过阻止蛋白质去稳定化来增强其活性。因为MYCN蛋白被认为是不可遏制的，所以需要治疗靶向MYCN及其附属蛋白的新方法。
肿瘤微环境是围绕肿瘤细胞的环境，由细胞和非细胞成分组成，例如成纤维细胞，细胞外基质，血管，免疫细胞，信号通路，炎症细胞和淋巴细胞。这种动态设置通过这些组分的复杂相互作用促进肿瘤发生。例如，CD163 +肿瘤相关巨噬细胞在神经母细胞瘤微环境中是丰富的，并产生免疫抑制细胞因子，其激活促进肿瘤发生和转移的信号传导途径如TGFβ。肿瘤微环境中活化的自然杀伤（NK）细胞可以通过细胞因子的支持谱保持其细胞毒活性来限制癌症的发展。然而，在高风险神经母细胞瘤中，存在一种免疫逃逸机制，其中高水平的TGFβ1产生趋化因子受体调节并损害NK细胞的细胞杀伤活性。
外泌体是从几乎所有细胞中脱落的纳米囊泡，并且几乎存在于所有生物流体中。外泌体含有多种RNA和蛋白质货物，这种货物可以通过外泌体从一个细胞转移到另一个细胞（即免疫系统细胞和癌细胞之间）。从NK细胞释放的外泌体通过细胞毒性因子穿孔素1和颗粒酶A和B对癌细胞具有细胞杀伤活性。尽管从外泌体中释放这些杀细胞蛋白是其细胞杀伤活性的一个来源，但是解释NK外泌体的细胞毒性的其他机制也是可能的。
在上一期癌症研究中，Neviani及其同事报道，NK细胞外泌体中存在的非编码RNA，特别是miR-186，可抑制肿瘤生长，并调节神经母细胞瘤中TGFβ依赖的免疫逃逸机制。一系列实验证明了miR-186与NK细胞衍生的外泌体的细胞毒性之间的关系。从健康供体的外周血分离的NK细胞收集外泌体。将从灭活的NK细胞分离的外泌体的细胞毒性与从IL15激活的NK细胞分离的细胞毒性进行比较。如所预期的，源自活化的NK细胞的外泌体对MYCN扩增的神经母细胞瘤细胞发挥细胞毒性，其相当于NK细胞。然而，当TGFβ的细胞杀伤能力使NK细胞失活并且将它们的外泌体与来自IL15活化的NK细胞的那些外泌体进行比较时，TGFβ处理的NK细胞具有较低的细胞毒性，而它们的外泌体的活性保持完整。值得注意的是，来自灭活的NK细胞的外泌体表达较低水平的经典杀伤蛋白，表明除这些蛋白之外的因子有助于它们的细胞杀伤活性。
之前报道miR-186在乳腺癌和其他实体和血液系统恶性肿瘤中具有肿瘤抑制特性。与正常组织相比，肿瘤抑制性miRNA的表达通常在肿瘤中减少。miR-186在MYCN扩增的神经母细胞瘤中下调。Neviani及其同事报道，与低风险神经母细胞瘤相比，miR-186在高风险患者中下调，而miR-186低表达的患者显示miR-186显着缩短了无事件生存率和总生存概率。有趣的是，他们发现miR-186不仅靶向MYCN和AUKRA，还靶向TGFBR1和TGFBR2。在TGFβ处理的NK细胞中miR-186水平降低，但在用IL15激活的NK细胞中miR-186水平增加。与对照寡核苷酸相比，用miR-186模拟物转染的NK细胞系具有减少的细胞增殖，迁移和侵袭。
为了评估miR-186作为神经母细胞瘤的潜在治疗剂，Neviani及其同事制定了阴离子脂多聚纳米粒子，其表面含有CD56抗体，以增强对NK细胞的靶向作用。载有miR-186寡核苷酸的CD56纳米颗粒抵消了NK细胞的TGFβ失活，表明miR-186可以重新激活患者肿瘤微环境中的NK细胞，否则其通过TGFβ信号传导而空转。此外，当miR-186外显子中miR-186表达被miR-186反义寡核苷酸抑制时，它们的细胞毒活性显着降低。使用神经母细胞瘤的原位小鼠模型和植入肾脏的GD2阳性和过表达MYCN的细胞系CHLA-136建立体内活性。含有抗GD2抗体的纳米颗粒的制剂增加肿瘤内miR-186表达。此外，负载miR-186的GD2纳米颗粒，但不是几种对照纳米颗粒，减少肿瘤负荷并促进存活。
Neviani及其同事的研究结果非常显着，表明miR-186在神经母细胞瘤患者肿瘤微环境中的表达降低不仅有助于MYCN的致癌活性，而且还有助于TGFβ途径对NK的免疫逃逸机制。该活性是miR-186抑制MYCN和AURKA蛋白并减弱NK细胞失活TGFβ途径能力的直接结果。尽管该研究为神经母细胞瘤的miRNA和外泌体治疗的其他临床前探索铺平了道路，但应注意使用免疫功能不全的小鼠进行体内实验。应进行使用免疫活性小鼠的未来研究，以进一步支持miR-186和NK衍生的外泌体对减少神经母细胞瘤的肿瘤发生的作用。
在体外和体内使用纳米颗粒递送miR-186寡核苷酸进行评估miR-186替代疗法的实验。尽管两种方法都是有效的，但通过使用衍生自活化的NK细胞的外泌体，甚至可以进一步增强体内活性。此外，miR-186以外的蛋白质和RNA载体可能有助于外泌体调节NK细胞免疫逃逸机制的能力。例如，先前报道NK细胞外泌体激活靶细胞中的胱天蛋白酶-3，-7和-9。为了实现激活的NK细胞外泌体作为临床治疗的潜力，必须实现可重复制造治疗性外泌体的方法.Fabbri实验室和合作者通过开发从活化的NK细胞中提取和纯化外泌体的方法在该领域取得了进展.NK细胞衍生的外泌体及其miR-186货物在神经母细胞瘤的临床前小鼠模型中是有效的。因此，离体衍生的NK外泌体可以与基于NK细胞的免疫疗法组合作为高风险神经母细胞瘤的潜在治疗选择。
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