即日起至 2019 年 6 月 30 日，扫描下方二维码填写个人信息可申请加入“NEB 甲基化测序建库体验星标计划”，请务必填写正确信息。我们在接到您的申请后会第一时间与您联系，为您介绍该颠覆性技术，您也有机会至 NEB 北京用户体验中心参与“NEB 甲基化主题日”体验完整建库流程。

信息审核将在申请日期截止后 1–2 月内完成，请您密切关注微信公众号通知，感谢您的理解与支持！

NEBNext 酶学转化法甲基化建库试剂盒，重新定义您的全基因组甲基化建库方式！

产品简介

虽然重亚硫酸盐测序是研究 DNA 甲基化的金标准，但这种转化方式会对 DNA 造成损伤，导致 DNA 断裂、丢失和 GC 偏嗜。NEBNext 酶学转化法甲基化建库试剂盒 (EM-seq^™) 提供了一种酶学方法代替全基因组重亚硫酸盐处理DNA（WGBS）的方法，并结合高效流程化的建库步骤，适用于 Illumina 平台测序。

高效的 EM-Seq 酶促转化可最大程度地减少对 DNA 的损伤，结合提供的 NEBNext Ultra II 文库制备流程，最终产生的高质量文库可以从有限的测序数据中更灵敏的检测到 5-mC 和 5-hmC。

EM-Seq 和重亚硫酸盐转化的方法原理

八大优势

更卓越的 5-mC 和 5-hmC 检测灵敏度
更高的比对率
更均一的 GC 覆盖度
能从有限的测序数据检测到更多的 CpG 位点
更均一的二核苷酸分布
更长的文库插入片段
更高效的建库流程
提供转化模块

EM-Seq 能得到更高的文库产量

采用 Covaris S2 仪器将 10 ng, 50 ng, 200 ng 不同起始量的人 NA12878 基因组 DNA 打断至 300 bp，同时作为 EM-Seq 和 WGBS 建库的起始样本。对于 WGBS 方法，使用 NEBNext Ultra II DNA 进行建库，随后采用 Zymo Research EZ DNA Methylation-Gold 试剂盒进行重亚硫酸盐转化。上述所有起始量，EM-Seq 都能使用更少的 PCR 循环得到更高的文库产量，表明 EM-Seq 显著减少了WGBS 方法中的 DNA 损失。误差条表示标准差。

NEBNext 酶学转化法甲基化文库

可获得更长的插入片段

采用 Covaris^® S2 仪器将 50 ng 人 NA12878 基因组 DNA 打断至 300 bp，同时作为 EM-Seq 和 WGBS 建库的起始样本。对于 WGBS 方法，使用 NEBNext Ultra II DNA 进行建库，随后采用 Zymo Research EZ DNA Methylation-Gold^™ 试剂盒进行重亚硫酸盐转化。两个文库均使用 Illumina MiSeq (2 X 76 bases) 测序，片段大小采用 Picard2.18.14 测定。图中绘制了每个插入片段出现的频率标准化后的数据，结果如图：EM-Seq 建库后的插入片段比 WGBS 方法得到的插入片段更长，说明：酶学转化法不会对 DNA 造成损伤，而重亚硫酸盐处理的 DNA 有严重损伤。

相较于 WGBS，EM-Seq 在更低的测序

覆盖深度情况下能检测到更多 CpG 位

点,并能实现更卓越的 GC 均一覆盖度。

采用 Covaris S2 仪器将 10 ng, 50 ng, 200 ng 不同起始量的人 NA12878 基因组 DNA 打断至 300 bp，同时作为 EM-Seq 和 WGBS 建库的起始样本。对于 WGBS 方法，使用 NEBNext Ultra II DNA 进行建库，随后采用 Zymo Research EZ DNA Methylation-Gold^™ 试剂盒进行重亚硫酸盐转化。两个文库均使用 Illumina NovaSeq® 6000 (2 X 100 bases) 测序，使用 bwa-meth 0.2.2 将测序数据与 hg38 进行比对。

A: CpG 位点检测：通过分析 3.24 亿双端数据得到 EM-Seq 和 WGBS 文库的 CpG 位点覆盖度，其中每条链都独立计数，最终得到最多 5600 万个可能的 CpG 位点。结果显示：EM-Seq 在更低测序深度能检测到更多的 CpG 位点。

B:相较于 WGBS，EM-Seq 在更低的测序覆盖深度情况下能检测到更多的 CpG 位点：图中显示了 EM-Seq 和 WGBS 两种方法在不同起始量，至少 1X 和 8X 覆盖度下检测到的独有和共有的 CpG 位点。EM-Seq 在至少 1X 覆盖度下比 WGBS 多检测到 20% 以上的 CpG 位点。而在至少 8X 覆盖度下，CpG 位点覆盖度差异增加至 2 倍。

C: GC 覆盖度：使用 Picard 2.17.2 计算 GC 覆盖度，图中显示不同 GC 含量时 (0-100%)，标准化后覆盖度的分布情况。结果显示：EM-Seq 文库显著提高 GC 覆盖度的均一性，无 AT 过度测序，也无 GC 测序不足，后两项都是 WGBS 文库的典型缺陷。

订购信息

产品名称	货号	规格
NEBNext 酶学转化法甲基化建库试剂盒	E7120S/L	24/96 reactions
NEBNext 甲基化建库酶学转化法模块	E7125S/L	24/96 reactions
NEBNext 酶学转化法甲基化建库多样本接头引物（双端检索引物）	E7140S/L	24/96 reactions
NEBNext Q5U™ 预混液	M0597S/L	50/250 reactions

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