希尔博士在接受外泌体NTA检测的技术咨询时,经常会被问到外泌体保存相关的问题。
譬如:
→我的外泌体已经在4度放了一周,还能做检测吗?
→我是1个月前提取的外泌体,一直放在-80度冰箱,还能做粒径检测吗?
→我的样本放在-80度冰箱两个月了,还能提取外泌体做检测吗?
→我在沈阳,寄样本去上海做检测,可以用冰袋寄送吗?
诸如此类………
目前并没有定论来回答以上问题,
我们应该去文献中寻找可参考的信息,
抑或——最科学的方式——自行做对照实验去探究。
Example 1
数据来源:Influence of Storage Condition on Exosome Recovery , DOI: 10.1007/s12257-015-0781-x
实验目的:探究不同温度下长时间保存对外泌体样本的影响
实验方法:对HEK 293的细胞培养上清提取分离外泌体,将外泌体样本分成4组,分别保存在-70℃、-20℃、4℃和室温下10天后,进行Western Blot检测,选择的marker为HSP70、CD63、CD9。
实验结果:结果显示,在-20℃和-70℃下保存的外泌体比较完整无损,而4℃和室温下CD63已基本没有表达,室温保存条件下HSP70的表达量也有所降低。
相较于4℃、-70℃和新鲜样本,室温存放的外泌体蛋白和RNA浓度的降低程度较明显。
本例说明,-20℃或更低温度是比较可取的外泌体长期存储条件。
Example 2
数据来源:Effects of storage temperature on airway exosome integrity for diagnostic and functional analyses ,DOI: 10.1080/20013078.2017.1359478
实验目的:探究不同温度下保存对外泌体样本的影响
实验方法:提取分离小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的外泌体,将外泌体样本分为三组——新鲜提取组和分别保存在-80℃、4℃ 4天的两组,通过DLS、TEM和zeta电位观察外泌体的变化。
实验结果:结果显示,相较于新鲜提取的外泌体样本,低温储存4天的样本粒径有一定程度的增大,电位数值降低,颗粒有团聚倾向;从TEM图片看,-80℃保存的外泌体有多层结构产生。
另外,该实验也通过无标记的LC-MS/MS评估了外泌体蛋白质含量,结果表明低温储存一定时间都会引发蛋白质泄露。所以,不论是从外泌体结构还是蛋白质含量角度出发,最好是在分离后立即进行各项实验。
Example 3
数据来源:Handling and storage of human body fluids for analysis of extracellular vesicles, DOI: 10.3402/jev.v4.29260
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