单抗精细纯化工艺策略

引言

现代单抗药物的产业的发展，伴随着细胞培养表达量的提高，带来后期纯化的压力不断增加，如何在下游工艺开发的早期能关注的到整个生产工艺的需求，面对中试放大后更加复杂的料液，如何开发出更稳定的精细纯化工艺，在满足高分辨率同时维持高的动态载量。如何用DOE等工具来优化这些步骤，寻找工艺空间，快速拿到最优的工艺参数。在第一步用rProtein A捕获后，收集的单抗组份中脱落的rProtein A，残留HCP,内毒素，核酸，及低聚体的去除是精纯工艺最主要的工作，那么如何高效的进行单抗的精纯呢？

单抗纯化的工艺

单抗纯化通常都先微滤澄清细胞培养液之后经rProtein A Focurose 4FF捕获，快速的去除大量杂质缩小体积，rProtein A洗脱收集组份在过复合型离子交换填料（MMA/MMC Focurose HF/HPR)去除HCP.残留rProtein A.核酸，内毒素，最后在过阴离子交换层析去除痕量的HCP及内毒素等。

单抗有较强的疏水性，所以疏水层析也常用于单抗的纯化。

在rProtein A捕获后，也可以凝胶过滤层析去除聚体及HCP等杂质。

复合型离子交换平台精细纯化单抗

MMA/MMC Focurose 6HF/HPR/HPL以离子交换作用为主同时兼具一定的疏水作用力，在蛋白单体和具体分离时有优良的品质，同时在低盐环境中不稳定的蛋白也适用于此填料纯化，在洗脱时改变pH通常比改变盐浓度有更高的敏感度。

用于单抗精细纯化的工艺过程：

样品：经rProtein A Focurose 4FF捕获的单抗组份

填料：MMA Focurose HPR

平衡缓冲液：20mM柠檬酸钠+20mM磷酸钠 pH 8.0

洗脱缓冲液：20mM柠檬酸钠+20mM磷酸钠 pH3.5

线性梯度30CV

采用DOE工具系统的优化pH，盐浓度，上样量，洗脱过程梯度等。

层析完后，用0.5-1M氢氧化钠清洗层析柱（接触时间30分钟）

当然单抗精细纯化还要结合最终的目的，用途，杂质情况等系统的选择合适的纯化路线。

特别提醒：最有效的方式就是多做实验，再做实验，然后系统的分析。