今天要继续来讲这篇小CDD的文章了，铁自噬
，其实是铁死亡的一个分支，自噬依赖的铁死亡。这个在很久之前介绍铁死亡的时候其实就已经讲过了，那么我们继续看看他们都做了点什么：
上次说到他们发现Fin56能调控自噬，于是他们做了一下自噬相关的mTOR信号通路
，看看Fin56是不是能通过mTOR信号通路起到作用的……
差不多就是这样
：
结果发现Fin56并没有对mTOR信号通路有啥影响，而是直接调控了自噬，这就说明，可能Fin56是mTOR不依赖的自噬调控剂
。既然Fin56能通过自噬调控促进铁死亡，那么在Fin56作用下，抑制自噬关键基因是否能逆转铁死亡呢？
于是他们就做了这样的实验，敲掉了ULK1（
也就是ATG1）和ATG3：
这俩基因都是自噬通路上比较关键的位置
，ATG1是调控自噬通路的，ATG3是调控LC3修饰的：
结果发现自噬在Fin56诱导铁死亡的过程中是必须的
……
那Fin56和自噬，到底引起了什么情况，导致了铁死亡呢？于是他们做了H2DCFDA染色
，这个又是一种ROS的检测方法，毕竟ROS是各类死亡的关键因素。这个染色原理其实就是H2DCFDA这种化合物吧，其实是修饰后的DCFDA，DCFDA是一种ROS不敏感的荧光染料。进入细胞后，DCFDA会被酯酶分解成有荧光的DCF
。而H2DCFDA进入细胞后，会被酯酶分解成H2DCF，在ROS氧化的情况下，才会变成有荧光的DCF：
这里他们不光用了自噬抑制剂，还用了PI3K抑制剂，为啥呢？呃，因为如果你们还记得《信号通路是什么鬼？》第一季的话
，应该能记得PI3K/AKT信号通路和mTOR信号通路的反馈环吧？PI3K其实是在mTOR更上游的一层，所以抑制后，应该也有作用：
接着是一个C11 BODIPY 581/591的染色，如果记得之前给你们讲的铁死亡实验的话应该还记得
，C11 BODIPY 581/591是脂质氧化的染料，氧化后脂质会使得荧光产生位移就像下面这个箭头指的位置一样：
可以看到PI3K抑制或自噬抑制后，Fin56诱导出来的ROS都有明显减少
。也就说明自噬可能会导致ROS的增加，引起铁自噬。
那这个自噬是铁自噬么？会不会是线粒体因为ROS产生的线粒体自噬呢
？于是他们做了个TOM20和LC3的共定位实验：
TOM20是线粒体自噬标志物，当ROS刺激了线粒体后，会导致线粒体膜电位下降（这个时候首先会想到JC1染色），然后LC3会形成自噬体，上面的P62会和线粒体上的PINK1-Parkin结合，然后自噬消化掉线粒体，这个时候线粒体膜上的TOM20也会被降解：
从图上可以发现，TOM20并没有明显下降，也就是说，这个自噬并不是线粒体自噬。那引起铁死亡的自噬是啥呢
？引起铁死亡的自噬，就是铁自噬。之前已经给你们讲过铁自噬导致铁死亡的关键，这里就不赘述了。关键的蛋白，就是铁蛋白，也就是Ferritin。他们发现Fin56能有效降低Ferritin表达，并且这个降低，会被自噬抑制剂回复：
讲到这里，就已经是蛮有意思的一篇文章了，虽然发在小CDD上，但也已经超出我对小CDD的预期了。当然也并不是没有什么瑕疵
，比如用PI3K抑制剂，其实没啥意义，因为PI3K/AKT和mTOR之间的关系太过复杂，并不能说明什么问题
。但对于线粒体自噬的排除，再引出Ferritin的降解，其实做得就不错了……要看这篇文献的话，就自己去PubMed上搜一下哈。好了，今天就给你们策到这里吧，祝你们心明
眼亮
。
封面：钢铁侠 响指 https://pic.sogou.com/
是不是看不懂这些信号通路？来了！终于来了！（现在出版的是第一季，包含12条信号通路，后续还会出三季哦……）
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