【流式学习】巨噬细胞清除之FAQ

氯磷酸二钠盐脂质体的给药形式有哪些？

氯磷酸二钠盐可用于体内/体外巨噬细胞的清除，可适用于尾静脉注射，腹腔注射，皮下注射，气管给药及直接注射等多种给药方式。

氯磷酸二钠脂质体能否用于体外巨噬细胞的清除？

可以的，带有负电荷的氯磷酸二钠的脂质体可以用于体外巨噬细胞的清除，并且也有相关文献报道。

氯磷酸二钠脂质体能清除哪些动物的巨噬细胞呢？

氯磷酸二钠脂质体主要适用于小鼠，大鼠及犬的巨噬细胞清除。

如果要清除的是非人灵长类体内巨噬细胞，可以选择包裹其他药物的脂质体产品。具体产品可咨询达科为销售同事。

我如何判断脂质体有没有被巨噬细胞摄取呢？

我们可以借助荧光标记类的脂质体进行观察。荧光标记的脂质体不含有氯磷酸二钠盐，但具有与氯磷酸二钠脂质体完全相同的脂质体特征。因此，借助荧光标记的脂质体可以观察脂质体在组织内的分布模式及其巨噬细胞对其的摄取。荧光标记的脂质体可通过流式细胞术和荧光显微镜进行观察。（具体荧光可咨询达科为销售）

什么是短期给药，什么是长期给药？

短期给药，也称为单次给药。即注射一次氯磷酸盐脂质体后在特定时间检测巨噬细胞清除效率或进行下游实验。

长期给药，即需要超过一周或以上实现巨噬细胞清除。以WT小鼠为例，一般我们首次给药200μl（20-25g体重），之后每周注射两次，每次用量100μl-150μl。

氯磷酸二钠脂质体能实现永久性巨噬细胞的清除吗？

不能！当氯磷酸盐脂质体在动物体内累计达到阈值实现巨噬细胞清除后，便会随泌尿系统排出体外。骨髓中巨噬细胞的前体细胞也会再生新的巨噬细胞，达到体内巨噬细胞的平衡。该方法并不能永久性的清除巨噬细胞，在不同组织中巨噬细胞均会再生，且巨噬细胞重建的时间也不尽相同。

动物在注射氯磷酸盐脂质体的过程中或注射后立即死亡，是什么原因？

可能注射了不均一的脂质体悬浮液。由于脂质体长期置于瓶内保存会形成沉降，因此建议在使用前轻轻摇晃均匀；如果由于沉降形成不均一悬液，那第一只动物所注射的计量与最后一只动物注射的计量就会发生明显的变化，剂量较高的动物可能会就造成死亡，而剂量较小的动物也未能获得较好的巨噬细胞清除实验结果。

此外，若脂质体刚从冰箱取出后，没有恢复到室温也会造成此现象的发生。

实验动物在注射后数小时或数天死亡，可能的原因是什么？

可能是由于待注射的动物在注射过程中，或注射前由于微生物污染导致的。体内巨噬细胞的清除，会导致病毒滴度，细菌或酵母感染几率的增加。

此外，腹腔注射氯磷酸盐脂质体的动物注射部位要保证洁净。建议注射前：用酒精处理注射部位，尽可能避免由于针头进入动物体内造成的微生物污染，建议使用一次性注射器。

动物在注射氯磷酸盐脂质体后没有达到预期的效果？

温度原因：脂质体容易受到极端温度的影响。正确的运输和储存方式是2~8℃，切记不能冻存，也不能暴露于高温之下，否则会造成脂质体磷脂膜的稳定性，导致氯磷酸盐从脂质体中泄漏出来。

产品有效期：需在保质期内使用完（保质期会在产品的瓶身上进行标注），否则可能会影响最终的巨噬细胞清除效果。

脂质体的稀释：我们不建议对脂质体进行稀释，稀释后可能会改变脂质体悬浮液中的渗透压，导致脂质体膜的不稳定性。

给药途径：虽然脂质体不能跨越血脑屏障，但可以选择适宜的给药方式达到多个组织部位巨噬细胞的清除。不同的动物种属，动物年龄，疾病模型的不同，氯磷酸盐脂质体的给药方式，剂量及给药时间都会影响最终的实验结果。

注射方式：尾静脉注射（i.v.）是常见的一种给药方式，在小鼠尾静脉注射时，如果感到阻力和/或在注射部位旁边鼓包，就代表可能尾静脉注射失败，氯磷酸盐脂质体未能正确给药。而腹腔注射（i.p.）应在腹腔膜内，而不是在肠道内。为了防止这种情况的发生，应该在计划注射的部位用酒精清洗，然后提起皮肤进行注射。

腹腔注射和尾静脉注射的区别？

尾静脉注射会在24h内清除脾脏，肝脏，骨髓的巨噬细胞。在注射的几分钟之内，氯磷酸盐脂质体会循环分布到达这些组织中。一般单次注射可维持5天巨噬细胞的清除，当然这也依赖于不同的组织部位。之后，骨髓中巨噬细胞的前体细胞会再生产生的新巨噬细胞，达到体内巨噬细胞的平衡。

腹腔注射通过淋巴液最终进入到血液循环达到组织中巨噬细胞的清除，相比于活跃的血液循环相比，腹腔给药循环相对更为被动，巨噬细胞清除维持的时间也较短，一般在给药3天后能达到最佳的清除效果。

最后再给大家强调一下，具体给药方式及用量等细节问题，强烈建议参考相关文献。毕竟大家使用的小鼠品系，年龄以及构建了不同的小鼠模型，对于氯磷酸二钠脂质体的承受能力都不一样，务必要进行优化！

在此，我们也给出常见的给药方案进行参考（以WT小鼠为例）：

推荐起始剂量为150μl-200μl/20-25g动物体重（i.v.或i.p.）。

请注意：具体剂量及给药方式需根据实验进一步优化！

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关于氯磷酸二钠脂质体的相关FAQ就整理到这里，如果还有任何相关的问题欢迎联系达科为的技术支持团队~

撰写：邓晨；责编：邓晨

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